【摘 要】
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该研究旨在该菌中建立噬菌体转染系统,以使用基因阻断技术研究与geldanamycin生物合成有关基因.首先研究geldanamycin产生菌Streptomyces hygroscopicus 17997的硫链丝菌素（ts
【出 处】
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中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部
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该研究旨在该菌中建立噬菌体转染系统,以使用基因阻断技术研究与geldanamycin生物合成有关基因.首先研究geldanamycin产生菌Streptomyces hygroscopicus 17997的硫链丝菌素（tsr）抗性特征.根据I型PKS基因序列设计简并性引物,以Streptomyces hygroscopicus 17997总DNA为模板,扩增出00.9kb片段作为探针,筛选Streptomyces hygroscopicus 17997基因组DNA文库,得到12个阳性克隆.将pSC116原始来源的基因文库质粒pCGBK10与该室利用AHBA（3-氨基-5-羟苯甲酸）探针杂交得到的5个阳性柯斯质粒pCGBA1,pCGBA3,pCGBA8,pCGBA15和pCGBA17分别转化S.lividans TK24原生质体,得到转化子TK-10,TK-1,TK-3,TK-8,TK-15和TK-17.将两个或三个转化子,TK-1和TK-17,TK-15和TK-17,TK-3和TK-8,TK-1、TK-17和TK-10,TK-15、TK17和TK-10,TK-3、TK-8和TK10进行联合共培养,产物以TLC和HPLC检测.该实验结果直接证明了pSC116中的2kb片段与geldanamycin生物合成相关,同时也表明该室已经克隆到完整的geldanamycin生物合成基因簇,为下一步分析各基因在生物合成中的作用以及该抗生素的组合生物合成研究奠定了基础.
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