莪术醇的提取及其脂质体的制备

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目的: ①研究从莪术油中提取莪术醇的方法。 ②建立莪术醇含量测定方法和高效液相色谱法测定莪术醇脂质体的包封率。 ③研究莪术醇脂质体制备方法及最优处方和最佳工艺条件。 方法: ①以莪术油为原料,进行减压蒸馏,收集208℃~216℃的馏分得到粗品,经柱分离或重结晶得到产品,先将两种方法得到的样品与对照品作薄层色谱法和差示扫描量热法分析,再将重结晶得到的样品和对照品作红外光谱、核磁共振和质谱对比分析。 ②分别用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法测定莪术醇对照品的含量,再用高效液相色谱法测定莪术醇样品及其脂质体的含量,色谱柱为ODS柱;以乙腈:甲醇(15:85,V:V)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为210nm;柱温为25℃;以外标两点法计算含量; ③用薄膜-超声分散法制备莪术醇脂质体,用高效液相色谱法测定莪术醇脂质体的包封率,以包封率为评价指标,用正交设计法筛选制备莪术醇脂质体的最优处方和最佳工艺条件,观察莪术醇脂质体的形态和粒径分布,并测定渗漏率。 结果: ①以莪术油为原料,进行减压蒸馏,收集208℃~216℃的馏分得到粗品,经柱分离或重结晶得到产品,经薄层色谱法和差示扫描量热法判断柱分离和重结晶方法得到的产品为统一物质,重结晶较柱分离纯度稍底,但产量高很多。因此采用重结晶法提取莪术醇,再经红外光谱、核磁共振、质谱分析鉴定提取的产物是莪术醇。 ②紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法测定莪术醇对照品的含量,三者相比较之后以高效液相色谱法最好。高效液相分析样品浓度在10~70μg/ml范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999(n=7);精密度试验RSD为0.92%(n=6);平均回收率为99.86%,RSD=0.76%,含量为98.9%,RSD=0.89%(n=3)。日内日间差异实验RSD均小于0.78%,表明样品稳定性良好。 ③制备莪术醇纳米脂质体的最优处方为磷脂:胆固醇为4:1,磷脂百分比为2%,药物:磷脂为1:20,水化介质为PH=7.4的磷酸缓冲液;最佳的工艺条件为水化温度为55℃,水化时间为2h,搅拌时间为30min,超声时间为2h。最优处方和最佳的工艺条件制备的脂质体包封率为98.09%,大多为圆形,平均粒径为89.5nm,在4℃冰箱存放一个月后的渗漏率为1.52%,存放三个月后的渗漏率为3.16%。 结论: ①减压蒸馏和重结晶相结合的方法提取莪术醇的工艺流程简单,适合大规模生产,而且纯度高。 ②高效液相色谱法测定莪术醇含量的方法简便、准确、快速,可用于莪术醇及其脂质体的含量测定,还可用于莪术醇及其制剂的质量控制。 ③用薄膜-超声分散法制备的莪术醇脂质体包封率高、粒径小、稳定性好。
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