月见草（Oenothera biennis L.）具有良好的抗炎及抗氧化活性。黄酮类物质是月见草发挥生物活性最主要的物质之一,但月见草中黄酮类物质的最佳提取条件尚不清楚。本试验通过闪式提取技术和响应面分析方法,对月见草茎和月见草籽甲醇提取物中总黄酮提取条件进行优化,并使用筛选后的最优条件进行提取分析,用于后续研究。以抑菌圈、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度来探究月见草茎提取物（OBSE）和月见草籽提取物（OBSD）对金黄色葡萄球菌的抑菌能力;通过碱性磷酸酶法、电导率法、SDS凝胶电泳法和扫描电子显微镜观察法等方法来进行细胞通透性相关的研究;利用溶氧仪对呼吸抑制率与叠加率进行测定,以明确OBSE和OBSD对金黄色葡萄球菌呼吸代谢途径的影响。响应面分析结果表明,在提取时间57.02 s,料液比1:30,提取剂浓度70.5%的条件下,月见草茎甲醇提取物中总黄酮类物质提取量最高,为76.4 mg/g;在提取时间54.95 s,料液比1:18.9,提取剂浓度65%,条件下月见草籽甲醇提取物中总黄酮类物质具有最高的提取量26.6 mg/g。抑菌试验结果表明OBSE和OBSD对金黄色葡萄球菌有较好的抑制效果,抑菌圈直径分别为13.75 mm和12.70 mm,最低抑菌浓度为1 mg/m L和2 mg/m L,最低杀菌浓度为2 mg/m L和8 mg/m L。经OBSE和OBSD处理后细菌膜通透性被破坏,菌悬液中碱性磷酸酶活性、电导率、核酸及蛋白质水平均显著降低（p<0.01）,通过扫描电子显微镜观察到金黄色葡萄球菌表面有破裂、皱缩等形态。通过呼吸抑制率与叠加率的检测确定OBSE可通过磷酸戊糖途径对金黄色葡萄球菌的呼吸代谢产生影响,OBSD可通过糖酵解途径对金黄色葡萄球菌的呼吸代谢产生影响,并分别对相应途径的关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸果糖激酶、蛋白激酶和己糖激酶进行检测,其活性显著降低（p<0.01）。综上所述OBSE和OBSD均通过影响细菌膜的通透性和呼吸代谢途径,对金黄色葡萄球菌产生抑制作用。