【摘 要】
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目的:探讨薯蓣皂苷（dioscin）对缺血再灌注与脂多糖诱导急性肾损伤的保护,并探讨可能的分子机制。方法:（1）在薯蓣皂苷抗肾缺血再灌注损伤（Renal ischemia/reperfusion inj ury,renal IRI）实验中,NRK-52E和HK-2细胞经不同浓度薯蓣皂苷预处理后缺氧4 h,复氧12 h,MTT检测细胞活力;体内60只SD雄性大鼠随机分成假手术组、模型组（I/R）、高
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目的:探讨薯蓣皂苷（dioscin）对缺血再灌注与脂多糖诱导急性肾损伤的保护,并探讨可能的分子机制。方法:（1）在薯蓣皂苷抗肾缺血再灌注损伤（Renal ischemia/reperfusion inj ury,renal IRI）实验中,NRK-52E和HK-2细胞经不同浓度薯蓣皂苷预处理后缺氧4 h,复氧12 h,MTT检测细胞活力;体内60只SD雄性大鼠随机分成假手术组、模型组（I/R）、高剂量组（I/R+Dio 60 mg/kg）、中剂量组（I/R+Dio 40 mg/kg）、低剂量组（I/R+Dio 20 mg/kg）,口服给药7天后进行双侧肾脏动脉缺血45 min,再灌注24 h后处死大鼠。检测BUN、Cr、LPSBP等生化指标,进行透射电镜（TEM）和组织病理切片分析。分子机制研究中,采用免疫荧光、Western blotting和Real-time PCR技术探讨薯蓣皂苷对HSP70/TLR4/MyD88炎症信号通路中相关分子表达的影响,在siRNA干扰HSP70、全基因过表达TLR4和ST2825抑制MyD88条件下分别考察薯蓣皂苷对信号通路中相关分子表达的影响。（2）在薯蓣皂苷抗脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肾损伤实验中,NRK-52E和HK-2细胞用不同浓度薯蓣皂苷预处理后经0.5μg/ml LPS处理24h,MTT检测细胞活力;体内60只SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组（LPS）、高剂量组（LPS+Dio 60 mg/kg）、中剂量组（LPS+Dio 30 mg/kg）、低剂量组（LPS+Dio 15 mg/kg）,60只C57BL/6J雄性小鼠随机分空白组、模型组（LPS）、高剂量组（LPS+Dio 80 mg/kg）、中剂量组（LPS+Dio 40 mg/kg）、低剂量组（LPS+Dio 20 mg/kg）,每组 12只,口服给药7天后腹腔注射LPS（10 mg/kg）,6h后处死。检测血清BUN、Cr水平和组织MDA、NO、GSH-Px、CAT水平,进行组织病理切片和TUNEL染色分析;分子机制研究中,采用Western blotting和Real-time PCR技术研究薯蓣皂苷对miR-let-7i/TLR4/MyD88炎性信号通路中相关分子表达的影响,在用inhibitor抑制miR-let-7i和ST2825抑制MyD88条件下分别考察薯蓣皂苷对信号通路中相关分子表达的影响。结果:（1）在抗肾缺血再灌注损伤中,薯蓣皂苷显著改善NRK-52E和HK-2细胞缺氧/复氧损伤,显著下调血清BUN、Cr水平,显著改善肾组织细胞刷状缘脱落、线粒体肿胀,减轻肾脏损伤,但对LPSBP无影响。分子机制研究表明,与模型组相比,薯蓣皂苷显著上调HSP70、IKBα蛋白表达,显著下调TLR4、MyD88、TRAF6、AP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1 和 IFN-γ蛋白或基因表达,抑制 p38、JNK和ERK1/2的磷酸化,抑制NF-κB和HMGB1的核易位,siRNA干扰、全基因过表达和抑制剂实验证实薯蓣皂苷抗肾缺血再灌注的作用靶点是HSP70/TLR4/MyD88信号通路。（2）在薯蓣皂苷LPS诱导的急性肾损伤实验中,薯蓣皂苷显著改善LPS诱导的NRK-52E和HK-2细胞损伤,显著下调BUN、Cr、MDA、NO 水平,上调GSH-Px和CAT水平,显著改善肾小管损伤程度;分子机制研究表明,与模型组相比,薯蓣皂苷显著下调 TLR4、MyD88、NOX1、Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-3、IL-1β、IL-6、MIP-1α、Fas和FasL蛋白或基因表达,显著上调miR-let-7i和SOD2蛋白或基因表达,抑制PI3K和Akt磷酸化,抑制NF-κB核易位和ROS释放,深入的基因转染和抑制剂实验证实薯蓣皂苷抗LPS诱导肾损伤作用是通过调控miR-let-7i/TLR4/MyD88信号通路改善炎症、细胞凋亡和氧化应激实现的。结论:（1）薯蓣皂苷通过上调HSP70来调控TLR4/MyD88炎症信号通路发挥抗肾缺血再灌注损伤作用;（2）薯蓣皂苷是通过上调miR-let-7i来调控TLR4/MyD88信号通路发挥抗LPS诱导急性肾损伤作用。总之,薯蓣皂苷在抗缺血再灌注与脂多糖诱导的急性肾损伤方面具有较大的研究和开发价值。
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