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目的:1.探讨肠道菌群与乙醇代谢能力之间的关系并筛选具有高代谢能力的菌株。2.探讨不同益生菌株对小鼠急性酒精中毒的缓解作用及机制。3.探讨不同来源同种益生菌株对小鼠急性酒精中毒缓解作用的差异。4.探讨联合益生菌株对小鼠急性酒精中毒的缓解作用及机制。方法:1.利用比色法测定人粪便和粪便全菌中乙醇脱氢酶(ADH)、乙醛脱氢酶(ALDH)活性。2.利用菌群分离鉴定技术,筛选益生菌候选菌株。3.采用乙醇灌服方法,建立急性酒精中毒小鼠模型。4.利用观察的方法,记录小鼠醒酒时间和肠道组织的变化。5.利用血糖仪和试纸,检测和记录小鼠血糖值变化。6.利用HE染色,观察小鼠肠道和肝脏病理变化。7.利用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测乙醇含量(BAC)、ADH、ALDH、乙醛、内毒素(LPS)和谷丙转氨酶(ALT)变化。8.利用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)。结果:肠道菌群与乙醇代谢能力的关系及益生菌候选菌株筛选酒量好人群粪便中ADH活性高于酒量差人群(p<0.01),ALDH未检出。酒量好人群粪便全菌中ADH活性高于酒量差人群(p<0.01),ALDH未检出。筛选的不同菌株乙醇代谢酶活性不同,酒量差组筛选出的植物乳杆菌乙醇脱氢酶活性低于酒量好组。益生菌对小鼠急性酒精中毒的缓解作用及机制1、不同益生菌对小鼠急性酒精中毒的缓解作用及机制1.1与酒精组相比,双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组醒酒时间显著缩短(p<0.01,p<0.05,p<0.05)。180min时各组血浆BAC均低于酒精组;270min时双歧组、高酶植物乳杆组、低酶植物乳杆组BAC显著降低(p<0.05)。酒精组小鼠血糖出现短暂性升高后降低,双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组血糖变化趋势比较平稳,趋于正常值。低酶植物乳杆组血糖变化波动较大,血糖急速由高到低。1.2酒精组肠道内ADH含量无明显变化,双歧组和高酶植物乳杆组有升高趋势。酒精组肠道内ALDH活性较低,双歧组和酵母组肠道内显著升高(p<0.05,p<0.01)。酒精组肠组织ALDH活性显著降低(p<0.05),双歧组显著升高(p<0.01),酵母组和高酶植物乳杆组有升高趋势。酒精组肠道内乙醛含量增加,双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组肠道乙醛含量降低。酒精组肠组织中SOD和CAT活性降低,MDA含量升高;酵母组SOD活性显著升高(p<0.01),酵母组和高酶植物乳杆组CAT活性显著升高(p<0.01,p<0.05),低酶植物乳杆组MDA含量显著降低(p<0.05)。酒精组肠道LPS含量显著升高(p<0.05),双歧组和高酶植物乳杆组LPS含量有降低趋势。大体观察,酒精组小鼠肠道严重破损,肠腔充血,肠壁透明。双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组肠道完整性最高,优于低酶植物乳杆组。1.3酒精组小鼠肝内的ADH活性略升高,双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组有升高趋势。酒精组小鼠肝内的ALDH活性降低,双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组含量显著升高(p<0.01)。酒精组肝内SOD和CAT活性均显著降低(p<0.05,p<0.01),MDA含量升高。其余各组SOD和CAT活力均有升高趋势,其中高酶植物乳杆组CAT显著升高(p<0.05),各组MDA含量降低。酒精组ALT显著升高(p<0.01),双歧组、酵母组和高酶植物乳杆组有降低趋势。1.4酒精组脑SOD(p<0.01)和CAT活性均降低,MDA含量升高。其余各组脑SOD和CAT的活性升高,MDA的含量降低。2、联合益生菌株对小鼠急性酒精中毒的缓解作用及机制2.1与酒精组相比,植物乳杆酵母组醒酒时间显著降低(p<0.05),180min各组血浆BAC均有下降趋势,270min植物乳杆酵母组显著降低(p<0.05)。2.2植物乳杆酵母组肠内ADH含量和ALDH活性均显著升高(p<0.01)。酒精组肠内乙醛含量增加,植物乳杆酵母组显著下降(p<0.05)。酒精组肠组织SOD和CAT活性降低,MDA含量升高;植物乳杆酵母组SOD活性显著升高(p<0.05),MDA含量下降。酒精组肠道LPS含量升高,植物乳杆组和植物乳杆酵母组肠道LPS含量显著减少(p<0.05)。HE观察,酒精组绒毛变短,破坏严重;植物乳杆酵母组,形态完整,排列整齐,绒毛的损伤较小。2.3植物乳杆酵母组肝脏ADH含量有升高趋势,ALDH活性升高显著(p<0.05)。酒精组肝内SOD活性呈降低趋势,MDA含量呈升高趋势;其他各组小鼠肝内SOD和CAT活性均呈升高趋势,MDA含量呈降低趋势。酒精组ALT显著升高(p<0.01),植物乳杆酵母组ALT有下降趋势。HE观察,酒精组小鼠肝脏细胞排列紊乱,肿胀,边界不清,植物乳杆组和植物乳杆酵母组细胞结构有所恢复。2.4酒精组脑SOD和CAT的活性降低,MDA含量升高;植物乳杆酵母组SOD活性显著升高(p<0.01),MDA含量显著降低(p<0.05)。2.5以上研究中植物乳杆酵母组各项指标均好于植物乳杆组,但无显著差异。结论:1.饮酒能力与肠道乙醇代谢酶相关。不同环境分离的益生菌株乙醇代谢酶含量不同,不同来源同种菌株乙醇代谢酶含量不同。2.假小链双歧杆菌、酿酒酵母菌和高酶植物乳杆菌具有显著的缓解急性酒精中毒能力。3.来源于饮酒能力强人群的高酶植物乳杆菌降解酒精和有害代谢产物清除的能力高于来源于饮酒能力差的低酶植物乳杆菌。4.联合菌株降解酒精和有害代谢产物清除的能力高于单株菌。