RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是最近发展的一种封闭基因表达的有效方法，其通过将双链RNA(doublestrandRNA，dsRNA)导入细胞中，在Dicer酶的作用下产生有活性的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，与该段RNA同源的mRNA产生特异性降解，从而导致特异基因表达抑制的转录后基因沉默现象(posttranscriptionalgenesilencing，PTGS)。许多研究表明在哺乳动物细胞中应用RNAi能高效抑制内源性和外源性基因的表达，因此应用RNAi技术抑制某一异常基因表达将可能用于病毒、肿瘤等疾病的治疗。 基因治疗是指通过有效的基因传递系统，将质粒DNA(plasmidDNA，pDNA)插入到目的细胞中，进行转录，最终将携带的基因信息传递给所连接的细胞中，从而达到基因治疗的作用。基因治疗中一个关键问题是如何选择合适的基因递送载体，寻找对病变组织有选择性、高效率且低毒的载体，以协助目的基因进入靶组织。目前，基因递呈载体主要有病毒载体(viralvector)和非病毒载体(non-viralvector)。近年来研究发现，壳聚糖是一种具有生物相容性和可生物降解的新型医用生物材料，与病毒载体或其它非病毒载体相比，具有低廉、无感染性、缺乏免疫原性、无致突变以及便于临床重复给药等优点，壳聚糖及其衍生物能与DNA形成聚电解质聚合物，是一种持久安全性和高效的阳离子聚合物基因转移运输载体，具有良好的临床应用前景。 CyclinD1为G1期细胞周期素，与细胞周期素依赖激酶-4/6(Cyclindependentkinase4and6，CDK4/CDK6)结合而形成复合物，使视网膜母细胞瘤(Rb)编码蛋白磷酸化，而与转录因子E2F分离，驱动细胞由G1期进入S期，促进细胞增殖，因而当cyclinD1或CDK4/CDK6表达失控时，可能导致细胞增殖周期失调。CyclinD1过表达可加速细胞进入S期，使细胞G1期缩短，加速细胞增殖，使细胞表型发生转化。研究表明，许多恶性肿瘤组织中都有cyclinD1的过表达。过表达的cyclinD1与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。 本课题主要研究内容：通过基因重组技术构建针对人cyclinD1基因的特异性小发夹RNA(smallhair-pinRNA，shRNA)真核表达载体，采用RNA干扰技术，运用壳聚糖作为基因治疗载体转染人髓性白血病K562细胞，体外观测其对cyclinD1基因的沉默作用以及RNAi后对K562细胞体外抗肿瘤效应，探索人髓性白血病基因治疗崭新的、有效的方法。