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目的分析RA患者滑膜液中的DC亚群,希望能在RA患者炎症局部微环境中找到一群致病性的DC新亚群,分析这群新DC亚群对滑膜局部微环境中的炎性细胞的功能影响,以便为类风湿关节炎的临床治疗提供新的线索和理论支持。方法1.选取陆军军医大学第一附属医院体检科26例正常人外周血作为健康对照组,临床采用陆军军医大学第一附属医院风湿免疫科经确诊的60例RA患者外周血及124例RA患者滑膜液作为实验组,RA患者符合《2018年中国类风湿关节炎诊疗指南》中对于RA诊断的标准;排除除RA外的其他可能影响机体免疫反应的疾病;2.采用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离提取正常人外周血和RA患者外周血中的单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs）以及RA患者滑膜液中的单个核细胞（Synovial Fluid Mononuclear Cells,SFMCs）,流式细胞术检测如下DC亚群:浆细胞样DC（Plasma dendritic cells,p DC）、髓系DC（Myeloid dendritic cells,m DC,）、CD1c+DC和CD141+DC;3.采用流式细胞检测术分析26例正常人外周血、60例RA患者外周血及124例RA患者滑膜液中DC细胞亚群的比例,同时将正常人外周血和RA患者外周血、RA患者外周血和RA患者滑膜液的DC亚群比例进行统计学比较;4.采用生物统计分析软件Graphpad Prism8分析RA患者外周血和滑膜液中各DC亚群与RA患者各临床指标之间的相关性;5.随后对6例RA患者外周血中PBMC和滑膜液中SFMC做RNA-seq数据检测,分析RA患者滑膜液中DC活化的生物标志物以及活化的转录通路的表达;寻找RA患者滑膜液中存在的新DC亚群;6.扩大样本量,流式细胞术检测26例RA患者外周血和24例RA患者滑膜液中DC表达的EBI3（Interleukin-27 subunit beta）;7.采用生物统计分析软件Graphpad Prism8分析RA患者外周血和滑膜液中CD11c+EBI3+DC、CD1c+EBI3+DC、CD141+EBI3+DC亚群与临床指标之间的相关性;8.之后我们采用EILSA实验技术检测41例正常人外周血上清液、41例RA患者外周血上清液和50例RA患者滑膜液上清液中IL-27的含量;9.最后我们用细胞因子IL-27刺激RA患者滑膜液中炎性细胞,化学发光免疫分析仪检测IL-27刺激RA患者滑膜液中炎性细胞的上清液中分泌的细胞因子的情况。结果1.与健康对照组相比,RA患者外周血中CD123+DC和CD1c+DC的比例降低（P<0.0001,P=0.0098）;而CD11c+DC和CD141+DC比例无明显差异（P=0.1088,P=4101）。RA患者外周血与RA患者滑膜液相比,RA患者滑膜液中CD11c+DC、CD1c+DC和CD141+DC比例明显高于RA患者外周血（P<0.0001,P=0.0007,P<0.0001）;而RA患者外周血和RA患者滑膜炎中CD123+DC的比例无明显差异（P=0.4399）;2.RA患者外周血和滑膜液中的CD123+DC、CD11c+DC、CD1c+DC、CD141+DC与RA临床指标DAS-28、RF、CCP、ESR、之间无线性相关。RA患者外周血CD123+DC、CD11c+DC、CD1c+DC、CD141+DC和RA患者滑膜液CD11c+DC、CD1c+DC、CD141+DC与CRP无线性相关,然而RA患者滑膜液CD123+DC与CRP呈负相关,差异有统计学意义,P=0.0362,R2=0.0393;3.与RA患者外周血相比,RA患者滑膜液中的CD28家族共刺激分子、细胞黏附分子、细胞因子受体间相互作用以及IFN-γ信号通路都表达上调,同时结果也显示NF-κB和LEF1转录通路上调;4.在RA患者滑膜液中存在一群不同于RA外周血活化的新DC亚群（Activate DC）,活化的基因表型有CCR7、LAMP3、CCL22等;而mo DC、c DC1、c DC2和p DC的基因表型RA滑膜液和外周血中的差异不大;5.RA患者外周血和滑膜液刺激组比不刺激组CD11c+EBI3+DC、CD1c+EBI3+DC以及CD141+EBI3+DC的比例都升高(（P=0.0004,P<0.0001,P<0.0001;P<0.0001,P<0.0001,P<0.0001）。另外,与RA患者外周血刺激组相比,RA患者滑膜液刺激组CD11c+EBI3+DC和CD1c+EBI3+DC的比例升高（P=0.0007,P=0.0005）,而CD141+EBI3+DC的比例无明显差异（P=0.2503）;6.RA患者外周血和滑膜液中的CD11c+EBI3+DC、CD1c+EBI3+DC、CD141+EBI3+DC与RA临床指标RF、CCP、ESR、CRP之间无线性相关。RA患者滑膜液中的CD11c+EBI3+DC、CD1c+EBI3+DC、CD141+EBI3+DC与DAS-28无相关,RA患者外周血中的CD11c+EBI3+DC、CD1c+EBI3+DC与DAS-28无相关,然而RA患者外周血中CD141+EBI3+DC与DAS-28负相关,差异有统计学意义,P=0.0106,R2=0.3263;7.RA患者滑膜液上清液中IL-27的含量明显高于健康对照组和RA患者外周血（P<0.0001,P<0.0001）,RA患者外周血上清液中IL-27的含量高于健康对照组（P=0101）;8.预实验结果表明RA患者滑膜液中炎性细胞在IL-27刺激72小时条件下分泌细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α明显高于其他组别的趋势,其中IL-8为敏感指标。而IL-1、IL-2和IL-10没有明显趋势。在其他刺激条件下（IL-12刺激、IL-12和IL-27共同刺激以及24小时刺激）没有明显的现象。扩大样本量后结果显示RA患者滑膜液中炎性细胞在IL-27刺激72小时条件下分泌细胞因子IL-8、TNF-α明显高于其他组别,差异有统计学意义（P=0.0010,P=0.0401）。分泌细胞因子IL-6与空白对照组相比无显著性差异（P=0.0638）。结论1.RA患者滑膜液中CD123+p DC并非直接参与RA的炎症进展,而CD11c+DC在RA患者的滑膜局部炎症形成中发挥着重要的作用;2.RA患者滑膜液中DC高度活化,在RA患者滑膜局部炎症发生过程中具有重要作用;并且RA患者滑膜液中存在一群活化的新DC亚群;3.EBI3（IL-27的亚基）可作为RA患者滑膜液中炎症发生的重要标志物,在RA的炎症过程中具有重要作用,值得我们深入研究;4.RA患者滑膜液上清液中IL-27的浓度明显高于RA患者外周血上清液和健康对照组上清液,并且IL-27刺激RA患者滑膜液中炎性细胞分泌细胞因子-IL-6、IL-8和TNF-α,EBI3异二聚体形成的细胞因子IL-27在RA局部炎症过程中发挥着重要的促炎作用。