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Nrampl(natural resistance associated macrophage protein)基因,即天然抗性相关的巨噬蛋白基因,该基因与伤寒沙门氏菌、利什曼菌、卡介苗分枝杆菌等多种细胞内感染病原体的易感性和抗性有关。本实验以15个鸡品种为实验动物,利用PCR-SSCP技术对15个鸡品种Nrampl基因第9外显子进行多态性分析和比较。以如皋鸡、漳州斗鸡和隐性白羽鸡为研究对象,测定部分免疫指标,并与SSCP结果进行关联分析;同时采用荧光定量PCR技术分析不同基因型个体的Nrampl基因在如皋鸡中的时空表达规律,主要研究结果如下:
1.在白耳鸡、大骨鸡、茶花鸡、固始鸡、北京油鸡、泰和乌骨鸡、藏鸡、如皋鸡、漳州斗鸡、文昌鸡、泰原鸡、萧山鸡、鹿苑鸡、隐形白羽鸡、安卡鸡15个鸡种中对Nrampl基因第九外显子进行单核苷酸多态性分析,结果发现5个突变位点:C242A、C315G、C357T、G419T、C427T。15个鸡品种(除鹿苑鸡)的杂合度都在0.382-0.500之间,多态信息含量在0.35左右。
2.以如皋鸡、漳州斗鸡和隐性白羽鸡为研究对象,检测了3个品种的部分免疫性状。结果显示:(1)如皋鸡法氏囊指数在2周龄时最大,胸腺指数在8周龄时最大,脾脏指数在6周龄时最大;(2)如皋鸡淋巴细胞转化率随日龄的增加而增加;(3)如皋鸡IgG和IgM含量在0周龄时最大,随后逐渐的变小,到最后逐渐达到平稳。(4)不同品种免疫性状相比,如皋鸡的H/L比值要显著低于隐性白羽鸡和漳州斗鸡(P＜0.05),而如皋鸡淋巴细胞转化率要显著高于隐性白羽鸡和漳州斗鸡(P＜0.05),漳州斗鸡的IgG和IgM含量显著高于如皋鸡和隐性白羽鸡(P＜0.05),同时如皋鸡也显著高于隐性白羽鸡(P＜0.05)。结果表明,中国地方鸡品种的综合免疫性能要优于外来引进品种。
3.不同基因型与免疫性状相关分析表明:如皋鸡不同基因型的大部分免疫指标存在显著差异,AA基因型的H/L值显著低于AB基因型和BB基因型(P＜0.05);AB基因型和BB基因型间也存在显著差异(P＜0.05)。AA基因型的淋巴细胞转化率,IgM含量和IgG含量的均值都高于AB基因型和BB基因型,且差异显著(P＜0.05),AB基因型与BB基因型之间差异不显著(P＞0.05),但AB基因型的均值要高于BB基因型。在漳州斗鸡和隐性白羽鸡中也有同样的趋势。这说明AA基因型个体在3个群体中都表现出了较好的抗逆性和抗应激的能力。
4.如皋鸡不同基因型与经济性状相关分析结果表明:AA基因型个体的腹脂重高于BB基因型,且差异显著(P＜0.05)。除此之外不同基因型的其他经济性状相比,差异都不显著(P＞0.05)。说明不同基因型与经济性状之间无明显负相关,进一步表明AA基因型可以作为候选抗病基因型。
5.Nrampl基因在鸡11个组织中都表达,胸腺、心脏和肝脏中呈高度表达,胸腺和法氏囊的表达规律基本一致。胸腺的表达量显著高于法氏囊(P＜0.05)。心脏和肝脏在O周龄时表达量较高,而法氏囊和胸腺在6周龄表达量较高;不同基因型与表达量相关分析表明Nrampl基因不同基因型个体在相同组织中表达水平不存在显著差异(P＞0.05)。但是AA基因型的均值在3种基因中是最高的,这可能和AA基因型的综合免疫性能较优有关。