【摘 要】
：
目的:通过甲基化特异性PCR（MSP）及RT-PCR探讨急性淋巴细胞白血病（Acute lymphocytic leukemia,ALL）细胞株Nalm6和人正常B淋巴细胞株（BCELL）细胞中TAOK1甲基化及Micro RNA-155-5P（MiR-155-5p）表达水平。同时探讨慢病毒敲低Nalm6细胞中MiR-155-5p及阿扎胞苷对肿瘤细胞的生物学及对TAOK1基因和蛋白的影响。并对Mi
论文部分内容阅读
目的:通过甲基化特异性PCR（MSP）及RT-PCR探讨急性淋巴细胞白血病（Acute lymphocytic leukemia,ALL）细胞株Nalm6和人正常B淋巴细胞株（BCELL）细胞中TAOK1甲基化及Micro RNA-155-5P（MiR-155-5p）表达水平。同时探讨慢病毒敲低Nalm6细胞中MiR-155-5p及阿扎胞苷对肿瘤细胞的生物学及对TAOK1基因和蛋白的影响。并对MiR-155-5p与TAOK1基因之间关系及其机制进行研究。从而探讨MiR-155-5p/TAOK1调控轴能否成为ALL治疗的候选靶点。方法:本课题分成三部分进行。第一部分:1.qRT-PCR探讨Nalm6细胞和BCELL细胞中MiR-155-5p m RNA表达差异,运用慢病毒（anti-mir-155-5p）感染Nalm6细胞。2.qRT-PCR验证慢病毒作用于Nalm6细胞前后其miR-155-5P mRNA表达变化。通过CCK8、克隆形成实验、细胞迁移实验检测慢病毒作用前后对Nalm6细胞增殖及细胞迁移的影响,通过流式细胞仪检测慢病毒作用前后对Nalm6凋亡及周期的变化情况。第二部分:1.qRT-PCR探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶TAO1亚型1（serine/threonine-protein kinase TAO1 isoform 1,TAOK1）在Nalm6细胞中表达水平。2.甲基化PCR（MSP）探讨TAOK1基因在急性淋巴细胞白血病细胞株Nalm6细胞中甲基化水平。3.qRT-PCR探讨阿扎胞苷作用Nalm6细胞前后TAOK1基因及其m RNA表达差异。4.流式细胞仪、CCK8探讨阿扎胞苷作用Nalm6细胞前后其对Nalm6细胞凋亡、增殖的影响。3.qRT-PCR及Western-Blot探讨阿扎胞苷作用Nalm6细胞前后其对TAOK1基因m RNA及蛋白表达影响。第三部分:1.qRT-PCR探讨阿扎胞苷作用前后MiR-155-5P表达水平。2.qRT-PCR探讨慢病毒干扰MiR-155-5P前后TAOK1基因表达水平。3.WB探讨与Hippo通路相关的TAO激酶1（Protein kinase 1,TAOK1）蛋白在慢病毒作用于Nalm6细胞前后蛋白水平变化。结果:1.qRT-PCR结果显示Nalm6细胞较BCELL细胞表达更高的mi R-155-5P。2.慢病毒干扰Nalm6细胞中mi R-155-5P后qRT-PCR结果显示Nalm6细胞实验组（SI-KD）mi R-155-5p m RNA表达量较对照组（SI-NC）显著降低。CCK8结果显示Nalm6细胞实验组在48h开始受到增殖抑制（p<0.05）。克隆形成实验结果显示Nalm6细胞实验组数量较对照组显著减少（p<0.05）。流式细胞仪检测Nalm6细胞周期结果显示两组细胞周期G0/G1期细胞比率无明显变化,但实验组G2/M期细胞比率较对照组明显提升（p0.05）。3.qRT-PCR结果显示Nalm6细胞TAOK1表达水平较BCELL低且MSP及BSP结果显示TAOK1基因存在甲基化。4.qRT-PCR结果显示阿扎胞苷作用Nalm6细胞后可以降低Nalm6细胞甲基化水平。细胞凋亡结果显示阿扎胞苷作用Nalm6细胞后可以促进Nalm6细胞凋亡,CCK8结果显示阿扎胞苷作用Nalm6细胞后可以抑制Nalm6细胞生长。同时qRT-PCR结果显示阿扎胞苷作用后可以提高TAOK1 m RNA及蛋白水平且可以降低Mir-155-5p表达水平。同时可以促进Nalm6细胞凋亡和增殖受抑。5.慢病毒感染后qRT-PCR结果显示Nalm6细胞实验组TAOK1 m RNA较对照组高（p<0.05）。7.WB结果显示慢病毒感染Nalm6细胞后其实验组TAOK1蛋白分子量较对照组降低（p<0.05）。结论:1.Nalm6细胞TAOK1基因存在甲基化且高表达mi R-155-5P。2.慢病毒感染ALL细胞株Nalm6细胞mi R-155-5P可以使细胞增殖受抑、细胞迁移能力下降,且阻滞细胞周期进程,但对细胞凋亡则无影响,且促进TAOK1基因表达水平上升。3.甲基化酶抑制剂阿扎胞苷可以逆转Nalm6细胞TAOK1甲基化水平,促进Nalm6细胞生长受抑和促进其凋亡,且促进TAOK1基因表达水平上升。4.阿扎胞苷可以降低mi R-155-5P表达水平且mi R-155-5p可以通过Hippo通路负调控TAOK1基因的表达。Mir-155-5p通过Hippo信号通路降低TAOK1基因甲基化水平而抑制肿瘤细胞的生长。
其他文献
目的:探讨综合医院儿童癫痫多学科协作（multidisciplinary team,MDT）诊疗门诊的管理及应用。方法:对2018年01月～2019年11月就诊我院癫痫中心MDT诊疗门诊癫痫患儿进行前瞻性研究。制定明确的纳排标准,经儿童癫痫专科医师诊治后推荐,可进行MDT门诊申请。采集患儿相关资料,构建个性化MDT（以儿童癫痫专科医师、癫痫外科医生、神经影像科医师、脑电图技师为核心,根据患儿的临床
目的:通过生物信息学方法中的加权基因共表达网络（WGCNA）筛选IgAN发生发展过程中的关键基因及miRNA-mRNA调控网络,探索其可能发病机制和潜在生物标志物。方法:首先,利用R语言的WGCNA包对GEO数据库中两张IgAN基因芯片进行加权共表达分析,寻找两个数据集中与IgAN疾病发生相关的关键基因模块,并通过GO功能分析和KEGG通路分析对鉴定出的关键模块内基因进行功能比较,以确认关键模块的
伯基特淋巴瘤是一种高度侵袭性的B细胞非霍奇金淋巴瘤。使用高强度的化疗可以有效地治疗伯基特淋巴瘤,特别是针对较年轻的患者。然而,老年人和免疫缺陷患者的治疗效果较差,这突显了寻找替代疗法的必要性。PHLPP2是PI3K/AKT信号通路的负调控因子,可以直接去磷酸化AKT的Ser473位点。目前已有研究表明,PHLPP2在多种实体肿瘤中异常表达,上调PHLPP2的表达可发挥其抑癌因子的作用,抑制肿瘤细胞
目的:探讨床边超声评估机械通气对膈肌功能影响的临床价值。方法:选择福建医科大学附属第一医院及晋江市医院2018年12月至2019年9月入住重症医学科的需要机械通气患者（MV组）及有建立人工气道无需机械通气（NMV组）患者作为研究对象。2组患者入组时收集其基本资料,包括性别、年龄、体质量指数、是否吸烟、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）、原发疾病等资料。研究起点、12小时、1天、2天、
目的系统评价对于一线内分泌治疗失败的激素受体阳性（Hormone receptor‐positive,HR+）/人类表皮生长因子受体2阴性（Human epidermal growth factor receptor 2‐negative,HER2-）晚期乳腺癌患者,氟维司群联合细胞周期蛋白依赖性激酶4/6（Cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6）、磷脂酰肌醇3激酶/
目的:（1）对比及评价美貌人群、福建地区口腔医生和口腔医学生的微笑美学特征;（2）调查福建地区普通人群的微笑美学观点;（3）探索微笑美学对口腔健康相关生活质量的影响及其相关性。方法:（1）通过网络搜索引擎收集100位美貌人群的正面微笑图像,并使用单镜头反光相机（D5300,Nikon Corp,Japan）采集100位口腔医生和100位口腔医学生的正面微笑图像。将所有图像导入图像处理软件,测量评估
目的:阑尾拥有丰富的淋巴组织,可以发挥淋巴器官功能。研究表明阑尾的存在,可能更利于肠道有益菌生长,对维持肠道微生态平衡有重要作用。然而,阑尾对肠道微生态影响的研究较少,现有的报道以及我们前期的研究显示阑尾切除后肠道细菌发生了显著变化,并可能与部分疾病的发生相关。检索数据库发现,目前尚无阑尾对肠道真菌影响的报道。本研究将通过ITS2测序,研究阑尾切除后肠道真菌的变化情况,进一步完善阑尾与肠道微生态关
目的:探究粪肠球菌（Enterococcus faecalis,E.faecalis）诱导的慢性根尖周炎（Chronic Apical Periodontitis,CAP）对高脂血症大鼠全身炎症细胞因子和主动脉炎症反应的影响。方法:32只5周龄雄性SD大鼠分别经正常饮食和高脂饮食喂养12周,其中在第6周时经血脂检测确认高脂饮食喂养组高脂血症形成,此后按以下随机分组构建CAP模型或行假手术,具体分组
【目的】研制用于筛查ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌的平板并对其进行性能评价;主动筛查并分析福建地区健康人群肠道中ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌定植情况、分子学特征、耐药模式等,有助于对ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌引起的感染的溯源、治疗和预防提供理论依据。【方法】1、收集福建医科大学附属第一医院住院患者中分离的198株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reac
目的体外分离培养人多生牙来源根尖牙乳头牙细胞（apical papilla cells of human supernumerary teeth,APCs-S）与人多生牙来源牙髓细胞（dental pulp cells of human supernumerary teeth,DPCs-S）并对比二者生物学行为差异。构建无翼型MMTV整合位点家族成员5a（wingless-type MMTV in