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本研究采用删减免疫法免疫动物，选用猪肝细胞作为耐受原腹腔免疫Ba1b／c小鼠，然后于免疫后15min、24h、48h腹腔注射环磷酰胺（Cyclophosphamide；CY）使小鼠对肝细胞膜表面抗原形成免疫耐受。免疫后10天眼球采血，经ce11-ELISA检测发现，CY100mg／kg剂量组血清抗体效价与未免疫小鼠接近，说明该剂量环磷酰胺可以使小鼠产生有效的免疫耐受。选取抗体效价低的小鼠用消化好的同种猪脂肪细胞经三次免疫后，ELISA检测抗体效价，选取抗体效价高的小鼠活体取脾脏用于获取抗体基因。 从经免疫的小鼠脾脏中用Trizol reagent一步法提取总RNA，用01igo（dT）-纤维素纯化mRNA，以此为模板反转录为cDNA第一链，采用RT-PCR以小鼠重链可变区VH和轻链可变区VL特异性引物扩增VH、VL基因片段，经重叠引物延伸PCR（SOE-PCR）把VH与VL用编码连接肽（Gly4Ser）3序列的Linker连接成单链抗体scFv基因，克隆入噬菌粒pCANTAB5E载体并转化E.coli TG1感受态细胞，在SOBAG上筛选转化子，并用M13K07超感染，获得了抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体的噬菌体文库。 总之，通过对抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体噬菌体文库的构建，我们对抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体的研究进行了一定的摸索，这将为该抗体的进一步研究打下基础。该抗体库的建立，为以后的筛选和表达研究构建了一个平台。