牛乳金黄色葡萄球菌生物被膜多糖的提取及其免疫原性的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:sun4679
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引起奶牛乳房炎(cow mastitis)、食物中毒以及临床感染的关键致病菌之一是金黄色葡萄球菌,长期以来,对该病原菌感染的治疗手段主要以抗生素为主,然而,抗生素大量持久的使用会导致细菌耐药菌株的形成,使预防和治疗难度不断增大。牛乳金黄色葡萄球菌耐药菌株的存在也同样给食品安全带来巨大隐患,因此,以金黄色葡萄球菌耐药菌株生物被膜免疫原性为切入点开展研究,为探索乳源金黄色葡萄球菌耐药菌株的快速检测方法提供依据。本试验以牛乳中金黄色葡萄球菌耐药菌株为目标菌,研究在TSB液体培养基中添加不同的营养成分,通过活菌计数观察生物被膜的生长情况,从而对金黄色葡萄球菌生物被摸的培养条件进行优化。经过培养的成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜,采用超声波法振荡洗脱已培养好的生物被膜,用无水乙醇沉淀法对生物被膜多糖进行了提取,并采用加酶法、过葡聚糖纤维素柱层析法和超滤浓缩法对提取的生物被膜粗多糖进行进一步纯化,同时用常规法(苯酚-硫酸法)测定其中多糖的含量。最后,用经过纯化好的生物被膜多糖来免疫BalB/c小鼠,同时采用间接ELISA法检测血清抗体效价。试验结果表明,金黄色葡萄球菌生物被膜在加有1%乳糖、2%NaCl和6%胎牛血清的液体TSB培养基中生长力最强。用此条件培养并提取和纯化的生物被膜多糖,其粗糖的纯度为13.99﹪,精制多糖的纯度为69.05﹪。核酸的含量为0.1109mg/mL,蛋白质的含量为0.0247mg/mL。用经过纯化的生物被膜多糖免疫BalB/c小白鼠,生理盐水注射组作为阴性对照,测定结果显示,纯化的生物被膜多糖没产生生物被膜多糖特异性抗体,没有刺激动物机体产生免疫应答,只是随着免疫次数的增加,OD值会逐渐增高,原浓度组在三免后一周出现了最大值,最大时达到了0.85。初步判定生物被膜多糖这类小分子物质是半抗原物质,是非T细胞依赖性抗原,作用于动物机体后未出现明显的免疫应答。
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