不同饱和度脂肪酸组成的单纯甘油酯对动脉粥样硬化模型中内皮细胞功能的影响

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本研究比较了三种单纯甘油酯(包括三亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯)对动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)模型中人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)功能的影响,并对其影响机制进行了初步探讨。采用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)刺激HUVEC来建立早期AS的模型。通过3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)法测定三种单纯甘油酯作用前后HUVEC存活率。通过流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)测定该模型中单纯甘油酯作用前后HUVEC凋亡率,采用PCR和Western Blotting分别测定细胞粘附因子(adhesion molecules, ADM)的基因以及蛋白表达量的不同。通过测定单纯甘油酯作用前后模型中HUVEC内丙二醛(malondialdehyd, MDA)以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的含量变化,初步探讨单纯甘油酯对早期AS模型中HUVEC的作用机制。主要研究内容及结果如下:1.建立了AS的早期模型。MTT的实验结果表明,ox-LDL刺激HUVEC24h能够明显的降低细胞的存活率,并且呈浓度依赖关系。当ox-LDL的作用浓度高于50μmol/L时,细胞存活率降低到48.6%。根据流式细胞术的实验结果,与对照组相比较,当ox-LDL的作用浓度高于50umol/L时,早期凋亡细胞的数目增加(从8.99%增加到15.48%),对晚期凋亡的细胞数基本无影响。而当ox-LDL的作用浓度为100μg/ml或150μg/ml时,细胞早期凋亡数目明显增加,分别为60.74%和72.39%。综合考虑细胞死亡率和凋亡率这两个指标,采用50μmol/L的ox-LDL刺激HUVEC24h来建立早期AS的模型。2.单纯甘油酯的细胞毒理实验。当单纯甘油酯的使用浓度为0,5,10,20,50,100μmol/L时,细胞存活率与对照组相比均无显著性差异。但当作用浓度大于100μmol/L时,细胞存活率明显降低,说明此浓度对HUVEC产生了细胞毒性。实验表明三种单纯甘油酯(三亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯)对细胞的安全使用浓度均为不高于100μmol/L。3.单纯甘油酯对AS模型中HUVEC的影响。MTT实验结果表明,三亚油酸甘油酯和三油酸甘油酯能够提高细胞的存活率和减少早期凋亡细胞的比例,且三油酸甘油酯的提高作用更明显,然而三硬脂酸甘油酯却能继续加重细胞的早期凋亡和死亡。从PCR和Western Blotting的实验结果可以得到,三亚油酸甘油酯和三油酸甘油酯能够降低细胞中细胞粘附因子ICAM-1和E-selectin的基因和蛋白的表达量并且三油酸甘油酯的降低效果更明显,而三硬脂酸甘油酯能够增加细胞粘附因子ICAM-1和E-selectin的基因和蛋白的表达。实验结果表明,定浓度范围内的LLL和000具有抗动脉粥样硬化发生的作用,并且000的抗动脉粥样硬化发生的作用比LLL更强,然而SSS能够促进动脉粥样硬化的发生。4.单纯甘油酯对内皮细胞影响机制进行了初步探讨。研究表明三亚油酸甘油酯和三油酸甘油酯能够提高氧化应激状态下的细胞抗氧化反应体系(包括SOD和GPX)和降低脂质过氧化产物MDA的含量。
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