目的:分离并鉴定弓形虫RH虫株来源的exosomes,检测弓形虫exosomes中弓形虫特异蛋白成分。探讨弓形虫exosomes对人急性单核细胞白血病细胞系(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)来源的巨噬细胞的调节作用,进一步探究MAPK信号通路和NF-κB信号通路在弓形虫exosomes调控巨噬细胞中的作用。方法:利用差速离心、超滤浓缩以及试剂盒提取相结合的方法,从弓形虫细胞共培养上清中分离弓形虫exosomes,并通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析以及Western blotting等方法对囊泡特征进行鉴定。用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点和不同浓度的弓形虫exosomes作用于细胞,通过免疫荧光技术观察弓形虫exosomes进入细胞的情况,实时荧光定量PCR和ELISA检测细胞因子的水平,荧光探针检测细胞中NO的产生。通过Western blotting以及免疫荧光技术检测MAPK信号通路和NF-κB信号通路中相关蛋白的表达水平以及通路蛋白的分布变化。结果:成功分离、鉴定弓形虫来源的exosomes。电镜结果显示分离获得的囊泡呈椭圆形,并具有完整膜结构,直径范围约30~150 nm;纳米颗粒跟踪分析结果显示粒径分布范围30~150 nm,平均粒径大小119.8 nm,与exosomes的经典特征吻合;Western blotting结果表明囊泡中含有外泌体标志蛋白HSP70和CD63以及弓形虫特异蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。弓形虫exosomes能够促进THP-1巨噬细胞分泌促炎性细胞因子及NO等介质,加速巨噬细胞炎症反应,从而促进巨噬细胞向M1方向极化。弓形虫exosomes能够促进MAPK/JNK信号通路的活化,并诱导大量磷酸化JNK蛋白入核。弓形虫exosomes促进NF-κB信号通路活化,表现为磷酸化IκBα增高,NF-κB二聚体活化,并大量入核。结论:成功分离并鉴定了弓形虫RH株速殖子exosomes。弓形虫exosomes对THP-1巨噬细胞具有正向调节作用,并能促进MAPK/JNK信号通路和NF-κB信号通路的活化。本研究为进一步阐明弓形虫exosomes的生物学功能及其在宿主与寄生虫相互关系中的作用提供依据。