对小鼠MII期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠MII期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验Ⅰ，HTF与mKSOM获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(P>0.05)。试验Ⅱ，注射hCG后13-15h采集的卵母细胞受精率高于17h(P<0.05)，而2-细胞发育率差异不显著(P>0.05)。试验Ⅲ，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(P>0.05)。试验Ⅳ，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵2-细胞发育率较高，差异显著(P<0.05)。 2.分析LIF对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加0.1-10ng/ml浓度LIF后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(P>0.05)，但当浓度为100ng/ml时，明显低于对照组(P<0.01)。培养液中添加0.1-25ng/ml浓度的LIF能提高8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(P>0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml组囊胚发育率与对照组差异显著(P<0.05)。而0.1ng/ml LIF处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(P<0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素B(CB)，钙离子载体A23187和乙醇分别与6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和CB联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合6-DMAP+CB与A23187联合6-DMAP+CB的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcL<,2>联合CB处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(P<0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(P>0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(P>0.05)。