本实验研究了牛性控冷冻精液生产过程中的精子分离过程和冷冻处理，对牛精子生理机能的影响，并对比了不同种公牛的精子分离效果；为探索性控冷冻精液受精能力下降的原因，进一步改进和完善这项技术奠定基础。 整个实验分为三部分。第一部分采用荧光染色法，对牛新鲜精液、分离精液、常规冻精和性控冻精的精子活力、顶体完整率、线粒体活性和获能状况进行检测，来评价分离和冷冻处理对牛精子生理机能的影响。结果表明：精液体外培养之初，新鲜精液与分离精液组在精子活力(83.5％vs83.7％)、顶体完整率(73.7％vs76.9％)、线粒体活性(75.7％vs78.1％)和获能(28.7％vs32.9％)上均无显著差异(P＞0.05)；但体外培养4-6h时，两组间出现了显著性差异(精子活力：61.5％vs54.4％；顶体完整率：51.5％vs43.6％；获能精子百分率：40.7％vs55.2％)(P＜0.05)。冷冻处理很大程度降低了未分离和分离精液的精子活力(83.5％vs52.7％，83.7％vs46.3％)、顶体完整率(73.7％vs57.0％，76.9％vs53.7％)和线粒体活性(75.7％vs55.7％，78.1％vs47.1％)，同时显著增加了获能精子百分率(28.7％vs41.9％，32.9％vs50.1％)(P＜0.05)。结论：分离处理对牛精子生理机能的损伤要小于冷冻处理；但分离处理使精子存活期缩短，对冷冻处理的耐受性降低。 第二部分采用荧光染色法，对流式细胞仪分离精子过程中的高度稀释、H33342染色和分离加压操作对牛精子生理机能的影响进行检测。结果表明：对照组与稀释组在精子活力(46.3％vs37.8％)、顶体完整率(54.8％vs44.2％)和获能(41.8％vs53.2％)上均存在显著性差异(P＜0.05)；分离组与前两组在所检测的四个精子指标上存在显著差异(精子活力：29.0％vs37.8％vs46.3％；顶体完整率：38.0％vs44.2％vs54.8％；线粒体活性：23.5％vs37.0％vs41.1％；获能精子百分率：62.5％vs53.2％vs41.8％)(P＜0.05)；而H33342染色组与分离组间差异不显著(精子活力：38.3％vs39.2％；顶体完整率：43.5％vs44.1％；线粒体活性：38.7％vs38.6％；获能精子百分率：52.0％vs52.1％)(P＞0.05)。结论：流式细胞仪分离精子过程中，分离加压和高度稀释是造成精子损伤的主要原因，H33342染色对精子生理机能的影响很小，无统计学差异。 第三部分对比了四头荷斯坦种公牛的精子分离效果，并研究了流式细胞仪分离处理对不同种公牛精子生理机能的影响。结果表明：不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离处理的耐受性存在显著差异，因此选择适宜的种公牛，对于提高精子的分离效率和分离精液的品质都有着重要的意义。