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TEV蛋白酶(tobacco etch virus protease)是烟草蚀斑病毒编码的NIa蛋白中27 KD的催化区域。由于它能特异性识别含有6个氨基酸(ENLYFQ)特定序列的蛋白,并进行酶切,酶切活性较高,且酶切的条件具有宽容性。因此在重组蛋白领域中应用广泛。本实验室依据大肠杆菌偏爱密码子和TEV的基因序列,通过重叠PCR的方法成功克隆了TEV基因。目前对TEV酶的研究主要集中在通过不同的方法提高TEV酶的表达量、精确的活性分析以及对TEV酶进行固定化,其中对于TEV酶的活性检测大部分是通过半定量进行分析,即通过酶切后蛋白的SDS-PAGE上条带的大小和结合蛋白浓度分析软件进行分析。本实验通过构建p ET28b-MBP-his-TEV、p ET28b-MBP-his-ACP-TEV、p ET28b-MBP-ybb R-his-TEV重组载体,成功表达和纯化出目的蛋白,并且通过酶活分析发现ACP蛋白和ybb R短肽对TEV酶的活性有促进作用,其中ybb R短肽的促进作用较大。ACP和ybb R标签经修饰后可介导TEV的固定化,精确的酶活分析将为TEV酶的定向固定化研究提供技术支撑,为此,本实验构建了p BAD24-α,p BAD24-his-MBP-α、p BAD24-his-MBP2-α载体,转化大肠杆菌DH5α,初步发现可以通过α-互补形成的β-半乳糖苷酶的显色反应来间接研究TEV酶的活性,将为用分光光度法定量分析TEV酶活性奠定基础。