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第一部分大鼠蛛网膜下腔出血后内源性硫化氢的生成及硫化氢对早期脑损伤的保护作用目的:探讨蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)大鼠内源性硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)主要生成途径及H2S对SAH后早期脑损伤(Early brain injury,EBI)的影响。方法:雄性SD大鼠96只,按随机数字表分为空白组、SAH组、SAH+Na HS低剂量组(SAH+Na HS-L 1.4mg/kg)、SAH+Na HS高剂量组(SAH+Na HS-H 5.6mg/kg),采用视交叉前池注血法制作SAH模型,48 h后处死。测定血浆、大脑皮层H2S含量,免疫组化双染色分别观察大脑皮层神经元胱硫醚-β-合酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)、3-巯基丙酮酸转硫酶(3-merecaptopyruvate sulfurtransferase,MPST or 3-MST)定位,western blot检测CBS、3-MST表达,测定新鲜脑组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性,测定脑组织含水量、伊文氏蓝(Evans blue,EB)含量,TUNEL评价脑神经细胞凋亡,记录神经认知功能评分。结果:CBS、3-MST在大脑皮层神经元均有分布,SAH48h后CBS表达下调,3-MST表达上调,H2S含量下降,氧化应激指标ROS、MDA含量显著升高,SOD、GSH-Px活性显著下降,脑组织含水量、伊文氏蓝含量显著升高,Caspase 3蛋白表达显著上调,脑神经细胞凋亡显著增多,大鼠神经认知功能评分显著下降。高低剂量Na HS预处理可弥补SAH后内源性H2S不足,可促使CBS、3-MST表达上调,可使氧化应激指标ROS、MDA含量明显下降,SOD、GSH-Px活性明显增强,脑组织含水量、伊文氏蓝含量明显降低,脑神经细胞凋亡明显减少,大鼠神经认知功能评分明显改善,且高剂量效果优于低剂量。结论:CBS/H2S、3-MST/H2S均参与SAH后内源性H2S的生成,H2S对SAH后EBI具有保护作用,其作用具有剂量依赖性。第二部分硫化氢对大鼠蛛网膜下腔出血后急性脑血管痉挛的影响目的:探讨硫化氢(H2S)对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后急性脑血管痉挛(a CVS)的影响,并对其可能机制初步探讨。方法:48只雄性SD大鼠随机均分为空白组、SAH组、Na HS低剂量组和高剂量组。造模48h后HE染色法、TUNEL与免疫组化双染色分别观察各组大鼠大脑前动脉A2段(ACA A2段)、大脑中动脉M1段(MCA M1段)部血管形态、管腔面积以及内皮细胞凋亡,western blot检测脑血管组织Caspase 3蛋白表达。结果:大鼠SAH模型,造模后ACAA2段管腔明显狭窄,血管内皮细胞凋亡明显增加,凋亡蛋白Caspase 3表达明显增强;Na HS干预可有效扩张血管、抑制内皮细胞凋亡,显著下调Caspase 3表达,且高剂量效果优于低剂量。结论:H2S可有效扩张痉挛的脑血管,其保护功能可能是通过抑制脑血管内皮细胞凋亡起作用,而且具有剂量依赖性。第三部分硫化氢对氧合血红蛋白诱导的体外蛛网膜下腔出血模型的影响目的:研究硫化氢(H2S)对体外蛛网膜下腔出血(SAH)的影响及其机制的初步探讨。方法:氧合血红蛋白(Oxygenated hemoglobin,Oxy Hb,10μΜ)模拟SAH刺激因素分别作用脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVECs)和神经元(Neurons),以Na HS(15μM、30μM)预处理。24h后观察细胞形态,统计BMVECs、Neurons存活率,测定活性氧ROS含量,收集细胞western blot检测Caspase 3表达。结果:Oxy Hb干预后存活神经元显著减少,活性氧(ROS)含量显著升高,Caspase3表达显著上调;Na HS干预后存活神经元显著增多,ROS含量显著下降,Caspase 3表达显著下调。Oxy Hb干预后存活脑微血管内皮细胞显著减少,ROS含量显著升高,Caspase 3表达显著上调;Na HS干预后存活脑微血管内皮细胞显著增多,ROS含量显著下降,Caspase 3表达显著下调。结论:在体外H2S通过抑制ROS生成改善SAH后BMVECs、Neurons凋亡。