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采用分子克隆技术首次获得了鳜(Siniperca chuatsi)肌肉生长抑制素( myostatin, MSTN)和肌酸激酶(creatine kinase, CK)基因cDNA序列,分析了它们在卵巢、肾脏、眼、肌肉、心脏、脑、皮肤、胃和肝胰脏中表达特征,为进一步研究这两种基因的时空表达、功能及其转录调控奠定了分子基础,为鱼类生长和能量代谢的分子机制研究提供了新的资料。
采用RT-PCR和RACE等技术克隆了鳜肌肉myostatin和creatine kinase cDNA全长序列,结果表明:myostatin cDNA全长序列2627bp,包括5’端非翻译区117bp,3’端非翻译区1376bp和开放阅读框(ORF)1134bp,共编码377个氨基酸,含22个氨基酸的信号肽;鳜MSTN具有脊椎动物MSTN的共同序列特征,含有1个蛋白酶水解位点RARR和9个保守的半胱氨酸残基,与其他脊椎动物MSTN氨基酸序列有着较高的相似性(62%~94%),特别是C端生物活性区,氨基酸数目都一致;与其它鱼类MSTN氨基酸序列相似度在90%~94%。CK全长序列1586bp,包括5’端非翻译区92bp,3’端非翻译区348bp和开放阅读框(ORF)1146bp,共编码381个氨基酸,鳜CK具有脊椎动物CK共有的保守结构域和肌型肌酸激酶(M-CK)同工酶的特异识别位点;具有脊椎动物肌酸激酶共有的6个高度保守的结构域。其中,结构域4区含有绝对保守、高度活性的Cys-283和腺苷酸结合功能域(LGXGXXGXV),结构域3区包含肌酸激酶特有的Lys-196。鳜CK氨基酸序列与M-CK型的相似度最高(91.9%~97.4%),而与脑型肌酸激酶(B-CK)和线粒体型肌酸激酶(Mi-CKs)的相似度较低。
RT-PCR检测了MSTN和M-CK在各组织中的表达情况,结果显示:MSTN在卵巢、肾、眼、肌肉、心、脑、皮肤和胃中有表达,肝胰脏未见表达。M-CK在皮肤、卵巢、肾脏、胃、肌肉和心脏中表达较强,在眼和脑、肝胰脏中表达较弱,组织表达差异为鱼类生长、能量调控研究奠定分子基础。