糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）是我国栽培范围最广、消费量最大的食用菌,因其富含高蛋白、低脂肪、价格低廉,越来越受到人们的青睐。光照是影响其生长发育的重要环境因子之一,然而有关其分子机制的研究比较少,特别是与原基、子实体形成相关的蓝光受体基因。本实验通过已知的担子菌模式生物裂褶菌（Schizophyllum commune）蓝光受体WC-1和WC-2保守PAS结构域,与JGI数据库中糙皮侧耳PC9、PC15转录组数据库进行比对,得到糙皮侧耳中的同源序列。设计引物,PCR克隆获得了CDS全长序列,并将其命名为PoWC-1和PoWC-2,通过在线网站和数据库对基因结构和蛋白功能进行预测;利用p EASY-Blunt E1原核表达系统对PoWC-1和PoWC-2进行异源表达验证其ORF是否正确;利用酵母双杂交技术验证PoWC-1和PoWC-2的互作;利用荧光定量对PoWC-1和PoWC-2进行转录水平分析;构建PoWC-1和PoWC-2的过表达及反义沉默载体,利用土壤农杆菌介导的方法转化糙皮侧耳。本文的结论主要如下:1、通过PCR成功克隆得到了糙皮侧耳PoWC-1和PoWC-2的CDS区,PoWC-1基因CDS区长1,956 bp,编码产物长651 aa,Gen Bank登录号KY348758。生物信息学分析结果显示:PoWC-1与糙皮侧耳PC15转录组数据库中的核苷酸序列具有100%的一致性,氨基酸包含三个PAS结构域和一个Zn F结构域。PoWC-2基因CDS区长2,316 bp,编码产物长771 aa,Gen Bank登录号MG679810。生物信息学分析结果显示:PoWC-2与糙皮侧耳PC9转录组数据库中的核苷酸序列具有99%的一致性,同样具有典型的PAS结构域和Zn F结构域。2、构建了原核表达载体E1-WC₁和E1-WC₂,并对其进行了诱导表达。SDS-PAGE结果显示:PoWC-1的分子量约为73 k Da,PoWC-2的分子量约为84 k Da,与预测大小相符。3、通过酵母双杂交技术对PoWC-1和PoWC-2的互作进行了探究,实验结果显示PoWC-1能和PoWC-2形成复合体结构。4、通过qRT-PCR对糙皮侧耳PoWC-1和PoWC-2基因在双核菌丝期不同光照时间下表达量进行了分析;在不同生长阶段和成熟子实体不同部位PoWC-1和PoWC-2表达量进行分析。结果显示PoWC-1和PoWC-2基因均在短时间光照内表达量上升,随着光照时间的增加而降低最后表达量趋于稳定;在糙皮侧耳不同生长阶段,菌丝期和原基期表达量比子实体期表达量高;对于子实体不同部位来说,菌盖PoWC-1和PoWC-2表达量相对最高,其次是菌柄、菌褶。5、通过构建糙皮侧耳PoWC-1和PoWC-2的过表达载体p Po-GPD-WC₁⁺和p Po-GPD-WC₂⁺和反义沉默表达载体p Po-GPD-WC₁^-和p Po-GPD-WC₂^-,并将其转入了根癌农杆菌GV3101中,通过根癌农杆菌介导的方法转化糙皮侧耳,为后续体内验证PoWC-1和PoWC-2的功能奠定基础。