热休克蛋白gp96是一种高度保守和呈单态性的蛋白质，是内质网中最丰富的蛋白质之一，人和小鼠gp96的氨基酸序列有96％的同源性。gp96具有分子伴侣功能，能够和细胞内的许多抗原肽非共价结合。gp96是抗原提呈的重要蛋白质。有研究表明，gp96参与MHC Ⅰ类抗原的提呈途径。动物实验亦证实，应用从肿瘤细胞中分离的gp96-制备物免疫小鼠可产生抗相应肿瘤的特异性保护性细胞免疫应答。 恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病。热休克蛋白与肿瘤发生的关系非常密切。正常情况下，gp96在细胞中呈持续性低水平表达。但肿瘤细胞中gp96分子的表达增加。热休克、重金属中毒、病毒感染、葡萄糖缺乏等应激条件也可诱导其表达增加。但是，到目前为止，还尚未见有关gp96的表达水平对肿瘤细胞的恶性行为和免疫原性的影响的报道。本研究采用基因重组和反义RNA技术，特异性地增强或抑制肿瘤细胞中gp96蛋白的表达水平，研究了其表达水平的改变对细胞生长速度和集落形成能力等细胞生物学行为的影响，并进一步研究了其对肿瘤细胞的免疫原性的影响。 首先，通过基因工程手段，以哺乳动物表达质粒pcDNA₃为载体构建了正义人gp96真核表达重组质粒pcDNA-hgp96和反义表达重组质粒pcDNA-antihgp96和pcDNA-anti96P。经限制性酶切确证了各重组质粒构建的正确性。