论文部分内容阅读
环氧合酶(COX)是重要的生理活性物质前列腺素(PGs)合成的限速酶,有两种亚型:COX-1和COX-2,COX-2主要在细胞因子的作用下合成PGs,因而在炎症、肿瘤过程中起重要作用。IL-1 β是诱导COX-2表达的前炎症因子之一。IL-1 β诱导气道COX-2表达的信号传导途径及调节机制尚不完全清楚。本研究目的在于探讨IL-1 β诱导COX-2表达的信号传导途径及核转录因子激活蛋白2 α(AP-2)在COX-2表达中的作用。 第一章 白介素1-β诱导A549细胞COX-2表达及信号传导途径 目的 蛋白激酶C(PKC)和有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号途径是参与细胞因子调节的重要信号途径,可被IL-1 β激活。本部分主要研究IL-1 β是否通过PKC和MAPK途径诱导COX-2表达。 方法 (1) IL-1 β 5ng/ml干预A549细胞0、3、6、9、12、24小时观察IL-1 β诱导A549细胞COX-2表达的时间过程。分别予以IL-1 β 0、0.1、1、5、10 ng/ml干预A549细胞6小时观察IL-1 β诱导A549细胞COX-2表达是否呈浓度依赖性 (2) 为研究IL-1 β是否通过PKC和MAPK途径诱导COX-2表达,分别予以有丝分裂原激活的细胞外调节激酶(ERK)抑制剂PD098059,P38MAPK抑制剂SB203580和PKC抑制剂H-7(终浓度为1 μ M、10 μ M、50 μ M)和IL-1 β(终浓度为5ng/ml)共同干预A549细胞9小时,检测干预后的COX—2蛋白质表达。 (3) 用RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,用Western blot检测COX-2