谷胱甘肽促进骨质疏松伴骨缺损愈合的实验研究

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目的:提高去势术建立雌性大鼠骨质疏松伴骨缺损模型的成功率,探讨谷胱甘肽对骨质疏松症骨缺损愈合的影响,为药物促进骨质疏松伴骨缺损的愈合提供新思路。  方法:经动物伦理委员会批准后将25只6月龄大的清洁级SD雌性大鼠随机分5组,实验组为A组、B组、C组、D组,空白对照组为E组,每组5只,均予正常饮食喂养。术前禁食禁饮12小时后依次对实验组的每只大鼠称重后采用40mg/Kg的剂量的戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉,麻醉剂量宁少勿多,约5分钟后麻醉起效,麻醉不满意时可追加20%的原剂量。麻醉起效后将大鼠俯卧位固定于木质解剖台上行普通X光机摄全身骨像,随后再将大鼠俯卧位固定于铺有无菌单的大鼠解剖台上采用背侧双切口入路切除大鼠双侧卵巢。钝行分离至腹腔后需用带线圆针穿过左手侧分离切口进行标记,确保在还纳多余组织时全部进于腹腔。切记分层缝合切口,术后无需拆线。术中及术后一段时间内观察大鼠眼、耳、足的血供及心脏跳动情况,可予与未麻醉鼠比较,无特殊后回巢继续饲养。心脏骤停者积极实施心脏按压及口腔吹气直至恢复自主心跳。空白对照组E组不做什么处理。3月后所有大鼠再次用同款普通X光机摄全身骨像,实验组、对照组两两对比也可同第一次摄片对比来诊断骨质疏松。随后从A组、B组、C组、D组、E组中随机抽取1只大鼠,取出大腿骨、腰椎各1块予脱钙、切片、染色等操作后显微镜下阅片观察骨质变化情况,最终确定模型建立成功。将成活的造模成功的大鼠麻醉后仰卧位固定于无菌大鼠解剖台上,于右侧胫骨外缘做一长2cm的切口,稍分离到达胫骨中段后,于胫骨中段外侧缘做一边长约为0.5cm的三角形缺口建立骨缺损模型。再将建立好的骨质疏松骨缺损的12只大鼠随随机分为实验组a组、对照组b组,每组6只,分别做好a1~a6及b1~b6的标记后置于普通X光机进行全身骨摄片。a组骨质疏松骨缺损大鼠按30mg/Kg的剂量灌胃谷胱甘肽,b组骨质疏松骨缺损大鼠灌胃同等剂量的生理盐水,每隔2周行X片检查观察骨缺损愈合情况,骨缺损愈合后通过注射大剂量麻醉剂处死所有大鼠,再统一埋葬。  结果:实验组的20只清洁级SD大鼠在骨质疏松模型建立中死亡3只。第一只死亡大鼠为手术第一只,由于手术时及结束的一段时间内未及时观察大鼠眼、耳、足的血供及心脏跳动情况,待做完A组实验组所有大鼠后才发现无心脏跳动,眼、耳、足苍白,经心脏按压抢救无效后死亡;死亡第二只大鼠为在切除卵巢后还纳剩余组织时未完全还纳已缝合切口,经多次徒手还纳无效后予拆线,几经周折后才完全还纳,随后第二日死亡。第三只因麻醉剂量过大死亡。结合X片检查结果提示剩余12只大鼠骨质疏松骨缺损造模成功。对照组未见死亡大鼠。术中严格无菌操作,术后所有大鼠未用抗生素,无一例感染。随机抽取骨质疏松大鼠行病理切片检查与对照组相比骨小梁明显稀疏。剩余的13只骨质疏松大鼠在骨缺损模型建立中均成活。随机去除一只后分组进行谷胱甘肽探索实验中,喂养谷胱甘肽的实验组骨缺损骨愈合时间为:4只10周愈合,2只12周愈合;对照组骨缺损愈合时间为:5只12周、1只14周愈合。实验组平均愈合时间为10.7周,对照组平均愈合时间为12.3周;两者进行两个独立样t检验得出P<0.05(P=0.011)。  结论:麻醉时严格按照公斤体重计算麻醉剂量,宁少勿多,麻醉不满意时可追加20%的原剂量;手术时及结束一段时间内及时观察大鼠眼、耳、足的血供及心脏跳动情况,及时抢救;术中严格无菌操作、动作轻柔,带线圆针穿过左手侧分离切口进行标记以致剩余组织完全还纳于腹腔;缝线时分层缝合切口等措施能在骨质疏松骨缺损模型建立中有效的避免大鼠的死亡,提高成功率。谷胱甘肽能促进骨质疏松伴骨缺损大鼠骨缺损的修复。
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