广西鸡鼻气管鸟杆菌的分离和鉴定及其PCR诊断方法的研究

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鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)是新近发现的与禽类呼吸道疾病有关的一种细菌。ORT感染引发鸡和火鸡的呼吸道疾病常伴随鸡群死亡率升高、产蛋量下降,蛋壳质量和孵化率下降、肉禽增重减少、治疗费用增加以及较高的废弃率等,给养鸡业造成了严重的经济损失。世界上已经有许多国家报道了ORT的感染,目前我国还尚无该病发生及研究的正式报道。本课题旨在广西的鸡群中进行ORT的分离和鉴定,并对ORT的快速诊断方法进行研究。 对广西不同商业鸡场、不同品种及不同日龄共466羽有呼吸道症状病鸡进行ORT的分离与鉴定,结果共分离出20株ORT;各个品种病鸡的分离情况表明,以土鸡、快大肉鸡的分离率较高,分别为45.4%和5.6%;不同日龄病鸡的分离情况表明,以4~10周龄最高,达14.5%;不同器官的分离情况表明,气管的分离率最高,达31.4%。对分离菌株进行生化反应鉴定,结果表明分离菌株生化鉴定结果与标准ORT参考菌株基本一致;应用两个标准参考菌株ORT1和ORT2制备的阳性血清对分离菌株进行玻片凝集试验和琼脂扩散试验,结果所有分离菌株均与ORT2阳性血清呈阳性反应。应用常规的聚合酶链反应(PCR)对分离株的16S rRNA基因的一段保守序列进行扩增,结果所有分离菌株均能扩增到与ORT标准参考株一样的一条784bp大小的特异片段,而其它4个阴性对照菌株均未能扩增到相应片段;对其中5个ORT分离菌株及2个标准参考菌株(ORT1、ORT2)的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定并对扩增的629bp核苷酸进行同源性比较,结果发现ORT分离株、标准参考菌株与GenBank上发表的国外9个分离株的同源性在99.2%~100%之间。取3个广西ORT分离株和1株
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