干细胞表面标记(CD90)与肺癌顺铂耐药的相关性研究

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背景:肺癌(Lung cancer)是当今社会最常见的恶性肿瘤之一,发病率及死亡率一直处于居高不下的状态,其5年生存率大约为15%[1],引起肺癌患者低生存率的原因之一是肿瘤细胞对化疗药物形成耐药。因此,探索化疗耐药形成原因并寻找相应的防治方法必将提高肺癌疗效,并使众多肺癌患者获益。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)学说的提出为肿瘤发生机制的研究提供了新的思路,也为肿瘤化疗耐药机制研究提供了新的视角。肿瘤干细胞是在肿瘤细胞和组织中发现有着干细胞特性的小细胞群,该群细胞与其他类型干细胞特点相似,均具有多向分化潜能和自我更新能力。目前认为肿瘤干细胞是肿瘤发生的根源。许多研究证实肿瘤干细胞在肿瘤的发生、转移、侵袭、复发和耐药中具有重要的作用[2]。已有研究表明化疗耐药、自我更新能力和多向分化潜能均是肿瘤干细胞的重要特性[3][4]。而且,肿瘤干细胞耐化疗的特性是促使肿瘤化疗后复发的重要因素。因此,深入研究肿瘤干细胞与化疗耐药之间的关系,必将为逆转肿瘤的化疗耐药提供新的理论依据,有助于在肿瘤的根治方面取得突破性的进展。以细胞表面特异性分子标记和侧群细胞(side population,SP)为标志的分离方法是富集肿瘤干细胞的主要手段。目前大量研究提示间充质干细胞标记CD90是重要的肝癌干细胞分子表面标记物,而CD90是否是肺癌干细胞标记尚缺乏相关研究[5][6]。在前期研究中,我们课题组运用悬浮球培养方法高效分离和富集出肺癌干细胞,进一步的研究发现:与肺腺癌细胞系A549相比,A549细胞球的肿瘤干细胞标记物CD90的表达较高。通过平皿克隆形成试验、成球试验、裸鼠移植瘤实验提示CD90+A549细胞自我更新能力及体内成瘤能力均强于CD90-A549细胞,初步证实CD90有可能是肺癌干细胞的分选标记。本研究试图通过研究CD90与肺癌顺铂(cisplatin,CDDP)耐药的相关性,从耐药角度探讨CD90是否是肺癌干细胞标记。目的:研究CD90与A549细胞顺铂耐药的相关性,在耐药角度探讨CD90是否是肺癌干细胞分子标志物。方法:1、通过成球实验、CCK-8、平皿克隆实验分别检测A549、A549/CDDP细胞的成球能力、体外增殖能力及克隆形成能力,初步探讨细胞干性与肺癌细胞耐药之间的关联;2、在上述研究基础上,流式细胞仪检测干细胞标志物CD90在A549、A549/CDDP贴壁细胞及细胞球中的比例,观察并比较两者之间的差异。3、流式分选CD90+A549、CD90-A549细胞,然后通过细胞毒性试验、裸鼠移植瘤试验从体内外分别比较两者的顺铂耐药性。进一步研究CD90与肺癌耐药相关性。结果:1、A549/CDDP细胞较亲代A549细胞在成球能力、体外细胞增殖能力及克隆形成能力方面均显著增强(p<0.05);2、在贴壁细胞和细胞球中,A549/CDDP所含CD90阳性细胞比例均显著高于亲代A549细胞(p<0.05);3、在细胞毒性实验及体内裸鼠移植瘤实验中, CD90+A549细胞的顺铂耐药性均显著强于CD90-A549细胞(p<0.05);结论:与亲代A549细胞相比,A549/CDDP细胞的自我更新能力显著增强,且CD90+亚群细胞的比例显著增高;CD90+A549细胞的CDDP耐药性显著强于CD90-A549细胞;从不同方面均提示CD90高表达与A549肺癌细胞顺铂耐药相关,进而从耐药角度提示CD90可能是肺癌干细胞标志物。
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