5-azaC对‘巨峰’葡萄果实发育的影响

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DNA甲基化在果实成熟过程中起重要作用,许多研究表明DNA甲基化与果实发育相关。本研究使用不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-azaC喷施于‘巨峰’葡萄果实上,探讨5-azaC对果实成熟的生理影响、DNA甲基化水平的变化,以及DNA甲基化与葡萄果实发育过程中ROS代谢的关系。利用高通量测序技术对5-azaC处理后‘巨峰’葡萄果实发育过程的转录组进行研究,揭示了葡萄果实发育转录组的整体表达特征,筛选出了一些响应5-azaC处理的基因,为深入开展葡萄果实发育调控研究奠定了基础。主要结果如下:1.10、50和100μM 5-azaC均促进了‘巨峰’葡萄的提早成熟,其中,100μM 5-azaC的促进效果最佳,使‘巨峰’葡萄比对照提前成熟20 d。2.MSAP分子标记分析100μM 5-azaC处理后不同发育时期葡萄果实基因的的甲基化水平变化,结果表明处理后的果实在所检测的果实发育时期,其甲基化率均低于对照。3.5-azaC处理影响果实的ROS代谢活动及相关生理指标。在花后75 d,所有浓度5-azaC处理后,葡萄的蔗糖和可溶性固形物含量均显著高于对照;100μM 5-azaC处理后的H2O2含量的变化趋势与对照相似;所有浓度5-azaC处理均能提高O2的产生速率;处理后的SOD活性高于对照,且在花后35 d与对照有显著差异。4.对100μM 5-azaC处理的葡萄果实样品进行转录组分析;测序共产生了13.3亿高质量reads,每个样本平均reads数约为4576万。比较了处理和对照在同一发育时期的差异表达基因,其数量变化范围为9(A3C3)-690(A5C5),对这些差异基因进行功能注释,发现主要涉及果实软化、光合作用、蛋白磷酸化及热胁迫相关的基因。对FPKM≥0.5的基因(19387)进行WGCNA分析,鉴定到与不同发育时期有高相关性的8个模块,筛选出一些hub基因,如POD4、OMT1和CLFSWN等。综上,5-azaC处理能够促进‘巨峰’葡萄果实提前成熟,在葡萄果实发育过程中,ROS代谢与DNA甲基化之间存在一定的联系,5-azaC处理改变了一些与果实发育及成熟相关基因的表达模式。
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