桑叶多糖提取分级及其抗辐射氧化胁迫作用

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桑叶为桑科植物桑MorusalbaL的干燥叶,药食同源。桑叶多糖具有降血压、血脂、抗炎等包括免疫刺激作用等多种生物活性,本研究以桑叶为研究对象,研究了桑叶多糖(MLP80%)的提取工艺、理化性质及抗辐射氧化胁迫作用。
  对超声波辅助和热水浸提2种提取工艺后桑叶残渣的形态特征和结构变化进行扫描电镜(SEM)分析,表明超声辅助提取对提高生物活性物质的传质速率有积极作用。结合单因素试验,采用响应面分析法优化桑叶多糖(MLP)的超声辅助提取工艺,确定了最佳提取条件:提取温度60℃,超声功率60W,提取时间30min,提取溶剂(水)与原料的比例(V/W,mL/g)为30∶1;多糖提取率为6.86±0.15%。
  采用乙醇对桑叶多糖进行分级,得到4个多糖级分(MLP20%、MLP40%、MLP60%和MLP80%)。通过体外抗氧化活性试验筛选,MLP80%具有更好抗氧化活性。采用化学和物理分析方法,测定了MLP80%和MLP中多糖、蛋白质、糖醛酸、硫酸根和总多酚的含量、溶解度和溶胀度等理化特性,MLP80%多糖含量显著高于MLP(P≤0.05),而MLP中蛋白质、糖醛酸和总多酚含量显著高于MLP80%,硫酸根差异不显著(P>0.05)。采用HPLC-GPC法测定MLP和MLP80%的分子量分别为322.78kDa和137.87kDa,得出MLP80%分子量分布较为均一和集中。采用红外光谱、紫外光谱和扫描电镜对MLP80%和MLP结构特性进行分析,MLP和MLP80%的紫外光谱图显示在200nm附近有一个最大峰,结果表明,具有多糖的特征,没有核酸和蛋白吸收峰。红外光谱分析表明,MLP和MLP80%均为具有O-H、C-H、C=O、C-O、S=O、C-O-S特征官能团的多糖。
  采用鸡胚(17 d)体内模型研究了MLP80%的抗辐射氧化胁迫作用。连续3天将MLP80%注射到鸡胚的气囊中,给予鸡胚(20 d)全身60Co-γ射线照射(5.0 Gy,1.0Gy/min)。于次日(21d)孵化当天处死雏鸡,测定体重、脏器指数、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT )活性及丙二醛(MDA )含量。与正常组相比,给予MLP80%组能提高鸡胚体内抗氧化酶系水平;与正常组相比,辐射模型组各脏器指数明显降低(P<0.01),模型组中抗氧化酶(CAT、GSH-Px、SOD)活性显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01),表明60Co-γ射线全身照射可引起器官萎缩、氧化还原失衡和脂质过氧化。而辐射前给予MLP80%组能恢复鸡胚体内氧化还原平衡,减轻辐射诱导的氧化应激。表明MLP80%可增加IL-2、IL-12等细胞因子的分泌(P<0.01),作为一种天然的免疫刺激剂,显著增强机体的免疫功能,具有抗辐射氧化胁迫作用。
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