葎草总黄酮对溃疡性结肠炎的治疗作用及大鼠血浆中木樨草素和牡荆素的测定研究

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目的研究葎草总黄酮对溃疡性结肠炎的治疗作用和相关机制,建立同时测定葎草总黄酮中木樨草素和牡荆素的高效液相色谱方法。方法①用三硝基苯磺酸(TNBS)诱发大鼠UC,并复制相关疾病模型。分别给予HTF(高、中、低剂量组),以柳氮磺胺嘧啶(SASP)作为阳性对照,观察各组大鼠结肠病理形态变化,通过结肠组织损伤评分(CMDI)、脾脏指数、胸腺指数及大鼠结肠组织中炎性细胞因子MPO、超氧化物歧化酶SOD、髓过氧化物MDA活性及病理切片来观察药物的初步药效。②依据《中国药典》2010版中关于缓控释制剂质量标准的规定,结合结肠定位给药系统的特点建立相应的质量标准评定。对药物剂型的制备工艺,临界相对湿度(CRH)、胶囊体外模拟肠道实验予以评价。③采用高效液相色谱法,色谱柱Diamonsil ODS C18柱(250mm×4.6mm,5um),流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢钾缓冲液(58:42,pH=4.0),检测波长350nm,流速为1.0mL/min,柱温30℃。结果①经过数据及相关病理切片的分析,与模型组比较,HTF组改善了大鼠的临床症状,减轻了结肠粘膜的损伤程度,降低了病变结肠组织中MDA、MPO的活性,提升了SOD活性,对抗胸腺萎缩与脾脏肿大作用明显。疗效以HTF450组显著。②所制备的结肠定位胶囊在人工胃液、人工肠液中几乎不释放,在人工结肠液中释放灵敏。③木樨草素和牡荆素分离度良好,无内源性杂质干扰。在38.5~4350ng/mL和16.5~1860ng/mL的范围内,木樨草素和牡荆素的校准曲线呈线性相关,相关性系数r为0.9996和0.9994,方法回收率分别为102.3%~104.7%和93.82~101.4%,日内和日间精密度(RSD)小于7.9%和5.4%。服用结肠定位胶囊后4小时,血浆中木樨草素的血药浓度158.16ng/mL,监测范围内的最高浓度为460.09ng/mL。入血的药量较少,结肠定位胶囊释放稳定。结论葎草总黄酮在一定剂量内对UC具有治疗作用,制备的葎草结肠定位胶囊释放行为较为准确,是葎草总黄酮发挥治疗UC方面效果的良好载体;建立的高效液相色谱方法稳定,结果可靠,可用于血浆中木樨草素和牡荆素浓度的检测。
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