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目的:观察桂枝养心方对缺氧环境下H9C2心肌细胞能量代谢过程中细胞存活率、丙酮酸脱氢酶(Pyruvate Dehydrogenase,PDH)、L-乳酸脱氢酶(L-Lactate Dehydrogenase,L-LDH)的影响,探索该药对缺氧环境下H9C2心肌细胞能量代谢的作用,并探索其发挥功效的途径,观察桂枝养心剂对缺氧情况下H9C2心肌细胞存活状态及能量代谢过程的影响。方法:1.用水煎法提取桂枝养心方浓缩液,选用不同乙醇浓度(80%、40%、60%)将桂枝养心水提液进行分级醇沉提取有效物质,醇沉液经真空抽滤后形成浸膏,置60℃干燥箱内烘干,4℃保存备用。2.H9C2心肌细胞分为正常对照组、缺氧模型组、40%乙醇桂枝养心醇沉提取物组、60%乙醇桂枝养心醇沉提取物组、80%乙醇桂枝养心醇沉提取物组,加入药物后将各组样本置入三气箱建立缺氧心肌细胞模型。3.镜下观察不同组别心肌细胞形态结构,采用MTT比色法检测细胞存活率,采用ELISA试剂盒检测各组细胞内丙酮酸脱氢酶(PDH)、L-乳酸脱氢酶(L-LDH)。结果:(1)细胞形态:正常组心肌细胞形态结构完整、规则,胞体饱满,少见脱落游离细胞;缺氧模型组细胞损伤明显,形态结构遭到破坏,细胞体皱缩或碎裂,伪足变短或消失,细胞间隙增大,脱落死亡细胞增多;与模型组相比,40%、60%乙醇桂枝养心醇沉提取物心肌细胞缺氧损伤在不同程度上得到改善,80%乙醇桂枝养心醇沉提取物心肌细胞形态、结构绝大部分规则,细胞网状联系紧密。(2)细胞存活率的比较:与正常培养组比较,缺氧模型组、40%、60%、80%桂枝养心方提取物组的心肌细胞吸光值均有所降低,缺氧模型组吸光值降低差异具有显著统计学意义(P<0.01);与缺氧模型组比较,80%桂枝养心方提取物组吸光值增加差异具有显著统计学意义(P<0.01),60%桂枝养心方提取物组吸光值增加有统计学意义(P<0.05),40%桂枝养心方提取物组吸光值增加差异无统计学意义。(3)L-LDH的比较:与正常对照组相比,缺氧模型组、40%桂枝养心方提取物组、60%桂枝养心方提取物组L-LDH显著升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),80%桂枝养心方提取物组L-LDH升高无统计学意义(P>0.05);与缺氧模型组相比,40%提取物组与缺氧模型组相比L-LDH降低,无统计学意义(P>0.05);60%提取物组与缺氧模型组相比L-LDH降低,存在统计学意义(P<0.05),80%提取物组与缺氧模型组相比L-LDH降低,存在显著统计学意义(P<0.01)。(4)PDH的比较:与正常对照组相比,缺氧模型组PDH含量降低差异存在统计学意义(P<0.05),各桂枝养心方提取物组PDH变化差异不存在统计学意义(P>0.05);与缺氧模型组相比,40%、60%桂枝养心方提取物组PDH升高不存在差异(P>0.05),80%桂枝养心方提取物组升高存在显著差异(P<0.01)。结论:1.H9C2心肌细胞在缺氧环境下,存在细胞形态及结构的破坏。2.桂枝养心醇沉提取物对缺氧环境下心肌细胞能量代谢障碍存在有效调节作用,其作用机制可能是增加细胞内PDH表达,促进葡萄糖代谢由无氧酵解向有氧氧化转移,增加缺氧环境下心肌细胞有氧氧化,增加ATP产生,此过程也可减少L-LDH含量,降低葡萄糖无氧酵解产生过多乳酸对心肌细胞产生的损伤,进而在一定程度上缓解缺氧环境下心肌细胞供能不足,改善心肌细胞结构破坏及功能受损,降心肌细胞死亡率。3.60%、80%桂枝养心方提取物对改善缺氧环境下心肌细胞能量代谢及降低死亡率作用更明显。