XT11所产黄原胶降解酶的分离纯化及酶学表征

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanggh20060363
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Microbacterium sp.XT11是一株能够有效降解食品级黄原胶并生成寡糖的微细菌。目前,对其降解黄原胶的分子机制还鲜有研究。本研究对XT11黄原胶降解酶系中的黄原胶裂解酶展开了纯化及酶学性质表征。经过疏水层析、离子交换层析等纯化步骤,将最后纯化的酶液进行了 SDS-PAGE电泳并测定比酶活力。结果表明,该裂解酶分子量约为110 kDa,比酶活为69.6 U/mg。随后的酶学性质测定结果表明,该黄原胶裂解酶的最适酶反应温度为40℃,20℃~40℃范围内酶活力较为稳定;最适pH值为6.0~6.5,在pH值5.5~7.0的条件下酶活较稳定。K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Li+、Mn2+能够显著提高该酶比活力,而Zn2+、Cu2+对裂解酶的活性有一定的抑制作用。动力学测试结果显示,该酶的米氏常数KmF=4.23 mg/mL,最大反应速度Vmax胃=8.22 μmoL/(min·L)。不同类型黄原胶底物对纯化的XT11黄原胶裂解酶活力也有不同影响,黄原胶去乙酰基修饰后,黄原胶裂解酶对其作用酶活不受影响;然而当对黄原胶进行去丙酮酸基团修饰后,裂解酶对其活性显著降低。对食品级黄原胶降解菌株XT11黄原胶裂解酶的纯化和相关性质研究为今后进一步明确黄原胶生物降解分子机制、不同侧链修饰黄原胶型新产品的制备以及具有生物活性寡糖的制备打下了基础。
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