目的明确Cyclin A,CDK2,BAG3在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况及相关性,探讨BAG3表达与胃癌患者临床病理特征的关系,初步研究BAG3及其S291位点磷酸化对于胃癌细胞增殖及抗凋亡能力的影响。方法收集福建医科大学附属协和医院胃外科2012年12月-2013年07月期间手术切除的180例新鲜胃癌组织及其癌旁组织,采用Western blot法检测Cyclin A,CDK2,BAG3的蛋白质表达情况;利用半定量免疫印迹实验的灰度分析和统计学方法分析Cyclin A,CDK2,BAG3之间的相关性及BAG3与胃癌患者临床病理特征的关系;通过构建BAG3过表达及沉默质粒:BAG3-WT,BAG3-S291A,BAG3-S291D;BAG3-sh RNA。采用瞬时转染的方法将各个质粒转染入胃癌细胞株MGC-803内,分别用Neomycin和Puromycin筛选出过表达及沉默表达BAG3基因的稳定转染胃癌细胞株。通过CCK8和平板克隆形成实验检测细胞增殖,通过流式细胞仪及WB检测c-PARP分析细胞凋亡,通过荧光素酶实验检测FOXO1转录活性的改变,通过细胞免疫荧光及核质分离检测FOXO1的细胞内定位变化。结果1.BAG3在胃癌组织、癌旁组织中均有表达,其主要定位在细胞质。与癌旁组织相比,BAG3在胃癌组织中的表达明显下调,且BAG3的表达量与Cyclin A/CDK2的表达量呈负性相关。2.Cyclin A/CDK2可以磷酸化BAG3的S291位点。3.BAG3 S291位点磷酸化导致其蛋白质稳定性降低,即蛋白质的半衰期变短。4.胃癌细胞中BAG3发挥着抑制细胞增殖的作用,若S291位点持续磷酸化后抑制细胞增殖更为显著。5.过表达BAG3的胃癌细胞株对于奥沙利铂诱发的凋亡更为敏感。6.BAG3介导FOXO1入核并促进其靶基因P27,Bim的转录活性。结论1.BAG3在胃癌组织中的表达明显下调,Cyclin A/CDK2的表达量明显上调。2.Cyclin A/CDK2通过磷酸化BAG3的S291位点使其蛋白质的半衰期缩短。3.胃癌细胞内过表达BAG3将促进FOXO1入核抑制胃癌细胞的增殖及抗凋亡的能力。