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背景和目的虽然表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)对具有EGFR基因活性突变的肺癌患者初始疗效显著,但随着时间的推移获得性耐药不可避免。EGFR基因20外显子第790位苏氨酸的二次突变(T790M突变)与大约50%的获得性耐药相关。目前,对于EGFRT790M突变所致的继发性耐药的非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer, NSCLC)患者没有统一、有效的治疗方法。放射治疗是NSCLC治疗的重要手段。理论上讲,放射治疗可以迅速消除局部病灶,能够降低有效系统治疗中存在的耐药性；与此同时,越来越多的回顾性临床分析结果提示：TKI治疗期间进行局部治疗可以降低患者的抗药性,显著延长患者的无进展生存期及总生存期,使患者获益。本研究旨在探讨电离辐射对NSCLC细胞株T790M突变所致耐药的影响及其潜在的分子机制。方法本研究选择人NSCLC细胞株H1975(L858R+T790M)和H3255(L858R)为研究对象,以不同剂量的6MV-X射线和EGFR-TKI单独或联合处理。采用细胞克隆计数法计算不同处理条件下细胞生存分数(SF)、拟合细胞存活曲线,观察放射敏感性；应用MTT法检测不同处理条件下两株细胞对EGFR-TKI的抗药性；实时荧光定量PCR法检测不同剂量X线照射后H1975细胞T790M突变量的相对变化；同时应用Hoechst33342、DAPI荧光染色法及流式细胞仪Anmexin V-FITC法检测不同处理组H1975细胞株的细胞凋亡形态及凋亡率；免疫印迹法检测不同处理组EGFR下游信号通路相关蛋白(磷酸化蛋白激酶B, phosphorylated AKT, P-AKT;)、磷酸化EGFR (phosrhorylated EGFR, P-EGFR)的表达水平。结果1、克隆形成实验检测T790M突变对NSCLC细胞株放射敏感性的影响两株细胞用不同剂量6MV-X线照射后进行克隆细胞形成实验,结果提示H1975细胞在各个剂量点的细胞存活率与H3255细胞相似,差异无统计学意义(P=0.952)。证实T790M突变对NSCLC细胞的放射敏感性无影响。2、MTT实验检测不同处理组NSCLC细胞株H1975和H3255对Gefitinib的抗药性两株细胞用不同剂量6MV-X线照射后进行MTT实验,结果提示未经放疗处理组H1975细胞株对Gefitinib的抗药性是H3255细胞株的85.9倍;经2.5GyX线照射后H1975细胞株对Gefitinib的抗药性是H3255细胞株的393.倍。两株细胞的耐药性之比随辐射剂量增加而呈下降趋势(P=0.008)。进一步证实T790M突变可以导致NSCLC细胞对Gefitinib的抗药性,放疗可以降低NSCLC细胞株T790M突变所致的耐药性。3、放疗降低T790M突变所致耐药性的潜在分子机制实时荧光定量PCR结果提示不同剂量X线照射后H1975细胞株T790M突变量降低；X线与Gefitinib联合处理组H1975细胞形态不规则,见较多细胞核碎裂,且有较多的漂浮死细胞,凋亡率为44.35±8.49%明显高于单独处理组,差异有统计学意义(P<0.05)；联合处理组相比于单独处理组可更强的抑制EGFR及蛋白激酶B的活性。结果提示电离辐射联合EGFT-TKI通过更强的下调EGFR信号旁路而增强EGFR-TKI的活性、诱导细胞凋亡,降低T790M突变量等潜在机制来克服T790M突变所介导的耐药性。结论具有EGFR活性突变的肺癌患者,在进行EGFR-TKI治疗期间,联合放射治疗对克服T790M突变介导的耐药性是非常有希望的治疗策略。