β-胡萝卜素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与PPAR-γ信号传输及活性氧产生的联系

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β-胡萝卜素作为一种天然色素,具有广泛的生理功能,特别是在抗癌方面的功能越来越受到人们的关注。许多流行病学研究显示β-胡萝卜素能降低人乳腺癌的发病率,但是对于这种化学预防作用的分子机制并不是很明确。PPAR-γ的配体能够促使乳腺癌分化和诱导其凋亡,但β-胡萝卜素与PPAR-γ蛋白和mRNA表达的关系,以及PPAR-γ信号传输在β-胡萝卜素抗癌中起的作用,至今还没有人研究。因此本论文设计研究β-胡萝卜素对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用和PPAR-γ表达之间的关系。(1)我们用Western blot和RT-PCR技术从蛋白和mRNA水平来检测β-胡萝卜素对PPAR-γ表达的影响,以及检测了β-胡萝卜素对PPAR-γ下游相关基因COX-2,P21WAF1/CIP1和P27 mRNA表达的影响,研究β-胡萝卜素与PPAR-γ的关系;(2)用MTT检测β-胡萝卜素对细胞活力的影响,用流式细胞技术和核染色技术检测细胞的凋亡,C-GFP质粒转染及激光共聚焦显微镜观察,及用Western blot检测胞浆中细胞色素C的释放;用荧光探针测细胞中活性氧水平的上升等,从形态上及分子水平研究β-胡萝卜素对乳腺癌细胞的作用,以及β-胡萝卜素通过调节PPAR-γ和活性氧在抗癌的作用中的分子机制。研究结果如下: 1.β-胡萝卜素上调PPAR-γ基因mRNA和蛋白的表达 β-胡萝卜素能呈时间效应从mRNA水平和蛋白水平显著上调PPAR-γ的表达,经β-胡萝卜素处理3天后,PPAR-γ mRNA和蛋白水平分别增加为对照组的1.7倍和3.5倍。经PPAR-γ的抑制剂GW9662预处理,能显著削弱由β-胡萝卜素引起的PPAR-γ的上调。 2.β-胡萝卜素对COX-2,P21和P27基因表达的影响 β-胡萝卜素呈时间效应下调COX-2基因的表达,上调p21WAF1/CIP1基因的表达,且PPAR-γ的抑制剂GW9662能显著削弱由β-胡萝卜素引起的COX-2,p21WAF1/CIP1的表达变化。β-胡萝卜素对P27基因表达的影响不显著。 由上面的结果可知,β-胡萝卜素不仅能上调PPAR-γ的表达,并能通过PPAR-γ信号传输调节P21和COX-2基因。 3.β-胡萝卜素对MCF-7细胞生长的抑制与诱导凋亡 用20μmol/L和50μmol/L β-胡萝卜素处理MCF-7细胞3天,细胞的活力分别为对照组的70%和50%。β-胡萝卜素对MCF-7细胞活力的抑制也呈时间效应关系,
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