随着化疗药物、糖皮质激素的广泛使用,以及实体器官和造血干细胞移植的深入开展,侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)的发病率和死亡率显著升高。IA的致病菌以烟曲霉(A.fumigatus)为主。及时有效地进行治疗对IA患者的预后至关重要,然而,现有的抗真菌药物对IA的治疗效果有限,且有较强的肾毒性和肝毒性等毒副作用,因此以烟曲霉疫苗为基础的预防接种法为防治IA开辟了新的途径。本课题组前期研究发现了一个可以与确诊IA病人的血清发生强免疫反应的烟曲霉抗原,即硫氧还蛋白还原酶GliT(TR),有望作为IA疫苗的候选抗原。研究目的探讨烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)对侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)的免疫保护作用;阐明TR免疫保护作用的机制。研究方法C57BL/6小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠用重组TR免疫2次,对照组用PBS代替抗原注射。感染烟曲霉前用环磷酰胺和地塞米松对全部小鼠进行免疫抑制处理,通过气管壁穿刺法向气管内注入烟曲霉孢子悬液,建立IA疾病模型。观察免疫组与未免疫组小鼠的存活率、存活小鼠与死亡小鼠肺组织匀浆真菌培养法测定小鼠肺内真菌载量、病理切片镜下观察肺组织病理损伤情况、小鼠肺泡灌洗液细胞分类计数,并通过ELISA方法比较分析了烟曲霉感染的免疫小鼠与未免疫小鼠、存活小鼠与死亡小鼠间肺组织匀浆IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的含量。评估TR蛋白的免疫保护作用及作用机制。研究结果小鼠7天存活率:免疫组为64.7%,对照组全部死亡。肺组织匀浆烟曲霉菌落形成单位(CFU)中位数:存活小鼠为0,死亡小鼠为44(P25,P75为21,70)(P<0.01)。组织病理学检观察:死亡小鼠肺肿胀出血、肺泡间隔增宽、大量炎症细胞聚集、组织灶状坏死,并有大量烟曲霉菌丝存在,而存活小鼠肺组织损伤程度轻,且组织间无菌丝。肺泡灌洗液涂片染色细胞计数显示:存活小鼠单个核细胞约占84.2%,中性粒细胞仅占15.8%;死亡小鼠单个核细胞占33.6%,中性粒细胞约占66.4%。细胞因子测定结果显示:存活小鼠肺匀浆中IFN-γ明显高于对照小鼠(P<0.01),但IL-4、IL-10、IL-17A的含量则明显低于死亡小鼠(P<0.01或0.05)。结论烟曲霉重组蛋白TR能诱导小鼠产生抵抗曲霉侵袭性感染的免疫保护力,是一个有潜力蛋白质疫苗候选抗原。通过测定肺组织中相关的细胞因子含量,提示TR蛋白的免疫保护效应与CD4+Th1细胞相关。