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放线菌是重要的抗生素产生菌。抗生素等次级代谢的研究需要借助大肠杆菌菌株进行基因克隆,并通过特殊菌株介导属间接合转移以便开展基因中断或基因簇异源表达等研究。目前没有同时兼备上述功能的大肠杆菌菌株。本研究在广泛使用的大肠杆菌克隆宿主DH10B的基础上,依次敲除了甲基化基因dcm和dam,得到DNA甲基化缺陷的非限制型大肠杆菌JTU006 (Dcm-)和JTU007 (Dam-Dcm-);探索了这些菌株在大质粒转化、接合转移和基因组文库构建及克隆次级代谢功能基因等研究中的应用。将带有39 kb放线