基于微管蛋白自组装构建新型多功能纳米载体用于胶质瘤诊疗一体化的研究

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目的:基于微管蛋白制备一种新型多功能纳米载体Col-Gd@Tub NCs,并探讨其在脑胶质瘤的T1加权造影增强及化疗中的作用。方法:采用温度依赖的聚合-解聚循环方法,通过高速离心的方法从猪脑中分离出微管蛋白。检测温度、PH等因素对微管蛋白体外组装的影响,制备不同大小的纳米载体。通过制备的纳米载体装载氯化钆和秋水仙碱,最终制得Col-Gd@Tub NCs。采用Malvern Zetasizer Nano ZS90分析纳米粒子的粒径分布;TEM检测纳米粒子的形貌、均匀性和分散性。电感耦合等离子体-质谱法测定了不同PH值条件下Col-Gd@Tub NCs负载钆元素的稳定性。CCK-8检测不同浓度的Tub、Col、Gd@Tub、Col-Gd@Tub NCs对293T和GL261毒副作用。3.0T MRI扫描仪检测不同浓度Col-Gd@Tub NCs的T1加权信号强度变化情况。Col-Gd@Tub NCs经尾静脉注射后,采用磁共振仪器进行T1加权扫描,并使用H&E染色观察主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)的组织形态学变化。构建胶质瘤皮下肿瘤模型,体内检测Col-Gd@Tub NCs的T1增强效果及抑瘤效应。结果:Col-Gd@Tub NCs具有良好的水溶性和高分散性。粒度仪和TEM结果显示:Col-Gd@Tub NCs的粒径较为均一,约为45 nm,分散性好。CCK-8实验表明,Col-Gd@Tub NCs对GL261细胞生长有抑制作用,且抑制作用明显大于相同浓度Col和Gd-Tub NCs,并且在一定浓度范围内其对293T的生长未产生明显抑制现象。电感耦合等离子体-质谱法的实验结果表明:酸性条件下钆离子从Col-Gd@Tub NCs上释放。体外磁共振成像时,发现微管蛋白(2 mg/ml)和gadolinium(1 mM)在缓冲A(PH值为7.5,37℃)中进行反应时,T1加权信号最高。HE染色结果表明,Col-Gd@Tub NCs对主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)无明显毒副作用。体内实验结果提示胶质瘤皮下瘤小鼠经Col-Gd@Tub NCs治疗后,肿瘤体积明显减小。由此得出结论,Col-Gd@Tub NCs可以有效抑制胶质瘤的生长。结论:成功制备多功能的Col-Gd@Tub NCs纳米粒子,水溶液稳定性好,粒径分布均匀,直径为45 nm。Col-Gd@Tub NCs有较高的T1加权MRI造影效果。经尾静脉注射后,Col-Gd@Tub NCs表现出良好的MRI造影能力和较长的体内循环时间(12 h),最终从膀胱排出体外。体内外研究表明Col-Gd@Tub NCs具有明显的抑制肿瘤细胞的生长。这些结果表明,Col-Gd@Tub NCs具有良好的肿瘤核磁造影与化学治疗的应用效果。
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