论文部分内容阅读
作为我国淡水养殖的四大家鱼之一的草鱼,由于味道鲜被广大消费者所喜爱。草鱼是常见优质蛋白的良好来源之一,具有很高的营养价值,如今草鱼越来越被广泛地作为原料,来加工提取各种产品和功能性食品,草鱼抗氧化肽便是其中的一种。抗氧化肽以清除自由基来体现它在体内的抗氧化性,我们通过酶解食源性蛋白来制备出的这种生物活性物质。抗氧化肽的氨基酸组成和结构都影响着其活性大小,因此,利用现代生物技术分析抗氧化肽的结构特点,并以单次口服给药的方式对机体对干预,了解其在体内的抗氧化性和代谢规律,为完善抗氧化肽在体内体外的抗氧化机理奠定了理论基础。本文优化了酶法制备草鱼抗氧化肽的工艺条件；分离纯化出一种草鱼抗氧化肽单体,并成功鉴定出其一级结构；研究了经单次口服给药后,小鼠体内抗氧化肽的吸收、分布情况；对经单次口服干预后,小鼠血液中酶和MDA的变化情况进行了分析。主要研究结论如下：1.双酶复合酶解法制备草鱼抗氧化肽的最佳工艺为：加木瓜蛋白酶800U／g,中性蛋白酶500U/g,pH为6.5,酶解温度为50℃,酶解时间4h。得到草鱼酶解液对DPPH自由基的清除率达到93.50%,水解度为35.63%,肽得率为97.29%。相对于单酶水解不仅提高了水解度和肽得率,同时提高了对DPPH自由基的清除率。2.利用超滤分离草鱼蛋白酶解液得到小于3kDa的组分清除DPPH自由基的能力最好,抑制率为89.27%。组分经过HPLC的分离纯化和N端测序后,得了出抗氧化活性较好的四肽：WEPH,当其浓度为1mg/mL时,对DPPH自由基的清除率达到73.52%,同时根据抗氧化肽的一级结构分析了氨基酸对肽抗氧化能力的影响。3.鼠单次灌胃2mg/kg·BW, 0.1mL的FITC-WEPH后,血药浓度表明。给药后2h血药浓度达到最大,并得出其绝对生物利用率为10.49%。实验表明,给药2h之内,胃肠中的FITC-WEPH分布较多,给药6h后,所有脏器内FITC-WEPH的含量都呈现下降趋势。肝脏中FITC-WEPH的蓄积量较高,代谢较慢,这表明FITC-WEPH参与了肝脏的氧化代谢。在脑中也有分布少量的FITC-WEPH,表明了其可以通过血脑屏障,参与大脑正常代谢活动。4.小鼠经单次灌胃2mg/kg,0.1mL的FITC-WEPH对小鼠血液的酶及MDA均有所影响。给药后GSH-PX活性呈现先上升后下降的趋势,在给药后4h时达到最大391.78±29.85U/0.1mL；给药后MDA含量呈现先下降后上升的趋势,给药2h后,含量达到最低,为9.90±1.45mol/mL;给药后T-SOD活性呈现先上升后下降的趋势,给药后2h达到最高,为142.61±8.09U／mL；给药后GSH-PX活力呈先上升后下降再上升趋势,给药后6h达到最大值T-AOC为10.566±2.05U/mL 。