蓝莓花色苷积累规律及其提取物对炎症相关结直肠癌的影响机制研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:qichen1988
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蓝莓,果实酸甜,适宜鲜食和加工,其经济价值和营养价值较高。研究表明,不同产地、栽培方式、品种及生长阶段直接影响果实的理化营养品质,因此研究不同品种及不同生长阶段蓝莓果实的理化性质、风味特征及营养价值对指导蓝莓生产及产品开发具有重要意义。炎症性肠病已经成为我国常见的消化系统疾病,持续的炎症导致结直肠癌的发生,严重威胁患者健康及家属生活质量。因此,研究蓝莓花色苷联合癌症临床用药对炎症性肠病及其相关结直肠癌的抑制作用机制,为蓝莓花色苷提取物作为结肠癌的临床辅助治疗药物提供理论依据,极具意义。本研究基于不同品种、生长阶段对蓝莓果实关键品质影响的分析,筛选出成熟阶段北青品种蓝莓果实制备纯化的蓝莓花色苷提取物,通过体内、体外实验,分别从炎症因子分泌、氧化损伤、细胞增殖、细胞凋亡角度分析蓝莓提取物联合临床用药对炎症性肠病及其相关结直肠癌的抑制作用及机制。主要研究结果如下:通过分析北青和蓝丰两个品种蓝莓果实不同生长阶段的花色苷及总酚含量,及分析比较转录组的差异,探究了蓝莓花色苷合成的分子机制。在两个品种中共发现13799条差异表达的直系同源基因,并将这些差异表达的直系同源基因进行功能富集。共筛选出9个参与花色苷合成的候选基因,分别是:CHI、DFR、F3’H、FLS、CHS、OMT、UGT、ANS和F3H,并通过RT-PCR对这些基因的差异表达进行验证。上述9个参与黄酮类化合物合成、代谢的基因的表达与花色苷含量呈现了一致的变化趋势。蓝莓果实生长发育引起的参与蓝莓黄酮类化合物合成的基因表达差异明显高于不同组织间的参与黄酮类化合物合成的基因表达差异。随着果实成熟,果实的品质特性发生变化,本实验分析了不同生长阶段对果实的适口性和理化性质的影响。考虑到不同生长阶段对蓝莓果实花色苷差异影响最显著,将北青和蓝丰品种蓝莓果实细化为五个生长阶段,分析他们的滋味、理化性质、花色苷组成及抗氧化能力。在果实发育过程中,甜味、酸味和涩味三种味觉特征有很好的响应;随着多酚、花色苷、黄酮、原花青素含量的变化果实颜色由绿色转变为蓝-紫色,且呈现蓝-紫色的飞燕草素和锦葵色素花色苷大量积累;果实提取物的抗氧化能力增强。北青和蓝丰品种成熟蓝莓果实氧自由基清除能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)值高达101.07 mmol kg~-11 TE和74.54 mmol kg~-11 TE,无论处于哪一生长阶段,北青品种蓝莓果实的生物活性物质含量及抗氧化能力均高于蓝丰品种蓝莓果实。实验通过分析不同品种蓝莓果实在不同生长阶段的口感及理化性质变化,明确了成熟蓝莓果实(B5、L5)适宜食用且具有较高抗氧化能力,选择成熟北青品种蓝莓果实作为后续研究的实验材料。蓝莓花色苷联合奥沙利铂对结肠癌细胞的细胞活力具有明显的抑制作用,且对正常人结肠组织细胞无毒性。通过流式细胞术检测发现,蓝莓花色苷与奥沙利铂单独或联合处理均能诱导G0/G1期细胞周期停滞、活性氧积累及线粒体膜电位损失,抑制促炎因子的分泌和表达,下调细胞周期相关蛋白的表达、激发凋亡相关的caspase级联反应并通过p‐Akt/p‐Bad/Bcl‐2通路诱导细胞凋亡。而且,花色苷联合奥沙利铂对HCT-116的抑制效果明显优于花色苷或奥沙利铂单独处理的抑制效果。蓝莓花色苷提取物抑制了LPS诱导巨噬细胞中促炎标志物的产生。蓝莓花色苷单独、或联合美沙拉嗪处理对于AOM/DSS诱导小鼠的炎症及相关结直肠癌模型出现的以下症状:结肠长度缩短、体重下降、瘤负荷增加、便血、结肠组织损坏,有明显的改善作用。而上述对炎症及相关结直肠癌保护作用主要是通过:阻断促炎因子的分泌、抑制抗凋亡蛋白和调控细胞增殖的细胞周期蛋白表达,及NF-κB信号通路的调节。蓝莓花色苷提取物联合美沙拉嗪可以用于炎症性肠病及其相关结直肠癌的临床治疗。
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