微波消融治疗乳腺癌脊柱骨转移的相关临床与基础研究

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目的探讨微波消融治疗乳腺癌脊柱转移瘤的临床疗效及亚致死温度条件下对乳腺癌细胞增值、迁移、对骨髓间充质细胞成骨、破骨现象的影响。方法1、通过临床回顾性研究2014年8月至2016年11月于我中心行脊柱开放手术联合局部微波消融治疗乳腺癌脊柱转移瘤患者12名,患者术后1月、3月、6月行CT及MRI术后随访检测脊柱转移瘤局部病变情况,参照相关评价指标评估肿瘤的局部进展和临床疗效。2、通过临床回顾性研究比较局部不完全微波消融治疗乳腺癌脊柱转移治疗前后骨量变化情况。通过模拟体外亚致死温度作用于乳腺癌细胞,比较检测在亚致死温度37℃、40℃、43℃、46℃不同作用条件下乳腺癌细胞引发的相关细胞表型:细胞增殖、细胞迁移、细胞划痕、微环境条件下作用小鼠间充质干细胞对成骨、破骨的影响。3、通过使用蛋白免疫印记法比较检测亚致死温度37℃、40℃、43℃下乳腺癌MCF-7细胞MAPK通路相关激酶表达,HSP27蛋白的表达差异,使用实时荧光定量RT-PCR检测骨髓间充质干细胞成骨、破骨基因表达情况。4、特异性阻断P38-MAPK磷酸化条件下,通过使用蛋白免疫印记法比较检测亚致死温度37℃、43℃下乳腺癌MCF-7细胞MAPK通路相关激酶表达,HSP27蛋白的表达差异,使用实时荧光定量RT-PCR检测骨髓间充质干细胞成骨、破骨基因表达情况。5、构建左心室注射亚致死条件37℃和43℃作用下乳腺癌细胞4T1的小鼠动物模型,比较两种温度条件作用下乳腺癌细胞在小鼠动物模型的成瘤速度、全身脏器转移、骨转移能力的差异。结果1、乳腺癌胸椎转移患者的平均随访时间是10.2个月。术后主要并发症发生率为8.3%,局部复发率为16.6%,脊柱转移瘤局部复发与消融术后局部残留相关。2、微波消融治疗luminal A型脊柱转移瘤患者局部微波消融后肿瘤骨量增加明显,差异有统计学意义,(P<0.05);亚致死温度37℃、40℃、43℃条件下比较乳腺癌细胞MCF-7、4T1细胞增殖情况比较,亚组细胞作用温度较高细胞增殖均减少,差异有统计学意义(P<0.05),46℃条件下,MCF-7、4T1所有的细胞全部死亡;MCF-7、4T1细胞细胞迁移情况比较,亚组细胞作用温度较高细胞有较高的迁移能力,差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7、4T1细胞划痕愈合情况比较,亚组细胞作用温度较高细胞有较高的愈合能力,差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7细胞产生条件培养基作用于小鼠骨髓间充质干细胞对成骨、破骨能力的影响,亚组细胞作用温度较高细胞有较高的成骨能力,差异有统计学意义(P<0.05);亚组细胞作用温度较低细胞有较高的破骨能力,差异有统计学意义(P<0.05)。3、亚致死温度37℃、40℃、43℃条件作用乳腺癌细胞MCF-7产生条件培养基作用小鼠骨髓间充质干细胞成骨相关标记物基因ALP、OCN、BSP和OPG表达随作用温度升高逐渐升高,37℃vs.40℃、37℃vs.43℃比较,差异有统计学意义(P<0.05);破骨相关标记物基因DCstam、C-SRC、TRAP、mcatk、ATP6VO、和NFATc1表达随作用温度升高而减少,差异有统计学意义(P<0.05)。HSP27表达比较,随作用温度升高而逐渐升高,37℃vs.40℃、37℃vs.43℃比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MAPK通路相关蛋白表达比较,p38-MAPK的磷酸化程度逐渐增高。4、特异性阻断P38-MAPK磷酸化条件下,亚致死温度37℃、43℃条件作用乳腺癌细胞MCF-7产生条件培养基作用小鼠骨髓间充质干细胞成骨相关标记物ALP、OCN、BSP和OPG基因比较,43℃亚组得到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05);破骨相关标记物基因DCstam、C-SRC、TRAP、mcatk、ATP6VO、和NFATc1表达,43℃亚组得到明显促进,差异有统计学意义(P<0.05);43℃条件下MCF-7产生培养基作用间充质干细胞成骨受到抑制,促进了破骨的发生,差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7产生HSP27表达受到了抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。5、37℃(对照组)、43℃(观察组)实验小鼠通过2周饲养后,动物成瘤能力观察组成瘤能力减弱,37℃vs.40℃,差异有统计学意义(P<0.05);观察组体重明显减轻,37℃vs.40℃,差异有统计学意义(P<0.05);观察组骨转移发生率增加,差异有统计学意义(P<0.05);局部病灶成骨能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)结论不完全微波消融乳腺癌脊柱转移瘤可能导致残留乳腺癌细胞发生相关表型变化,并致肿瘤的病灶局部成骨环境的形成,进一步诱导破骨细胞的产生,p38MAPK磷酸化、HSP27激活参与了上述过程,造成局部肿瘤的复发或转移等恶化进展,临床治疗过程中,应通过有效的物理阻隔将脊髓神经保护后,提高局部消融温度,降低消融残留,进一步提高微波局部治疗肿瘤疗效。
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