血栓疾病和高尿酸血症已成为严重威胁人类健康和生命安全的两大疾病,针对此类疾病的多肽药物及其保健品因其独特的优势成为国内外的研究热点,本文以固态发酵的螺旋藻产物为研究对象,分别以纳豆激酶活性和黄嘌呤氧化酶（XO）抑制活性为导向对螺旋藻发酵产物进行分离纯化和功能评价,并利用分子对接技术研究了降尿酸肽和黄嘌呤氧化酶间的构效关系,为开发具有显著溶栓活性和降尿酸活性的药品和功能性食品提供理论指导。主要研究结果如下:（1）首先确定了固态发酵螺旋藻生产纳豆激酶的最佳工艺条件。以纳豆激酶活性为响应值,对固态发酵中螺旋藻和甘蔗渣的物料比、初始料水比、接种量和发酵时间等因素进行优化,得到固态发酵的最佳条件为:物料比1:1,料水比为1:1.5,纳豆菌接种量12%,发酵时间52 h,发酵温度37℃。在最优发酵条件组合下,所得纳豆激酶的活力可达1139.628 U/m L（28490.7 U/g）,与优化前相比,纳豆激酶的活力提高了约70%。发酵优化得到的纳豆激酶活力实际值与通过响应面得到的模型拟合度较好。同时发现在发酵过程中,蛋白质和还原糖的消耗与微生物生长存在正相关关系,纳豆激酶的活力变化与纳豆菌的生长情况一致。（2）通过固态发酵获得的纳豆激酶进一步超滤分离,结果表明30 k Da～50 k Da分子段部分的纳豆激酶活性最高,即1941.463 U/m L。该部分同时具有较强的抗氧化活性,在5 mg/m L时,总抗氧化能力和羟自由基清除能力分别可达57.6%和68.8%;80 mg/m L时,对超氧阴离子自由基的清除率可达99.6%。对此部分的纳豆激酶活性稳定性进行测定,结果表明,该酶最适反应温度为37℃,在4℃～60℃范围内均可保持较高的酶活。其最适p H为10,最适p H范围为6～11。该酶不存在明显的金属离子激活剂,K+、Mn2+、Mg2+和Ca2+对该酶存在较弱的抑制作用,作用后的酶活均在80%以上。Fe2+、Cu2+和Zn2+对酶活有较强的抑制作用,其中Cu2+抑制作用最强,可使酶活下降到12%左右。DTT（二硫苏糖醇）和EDTA（乙二胺四乙酸）对纳豆激酶存在一定的抑制作用,表明该纳豆激酶可能是一种含二硫键的金属蛋白酶。体外模拟人工胃肠液实验表明,该纳豆激酶具有良好的胃肠液耐受力,经过人工胃液处理5 h后酶活基本没有变化;经胃液处理2 h后再经肠液处理5 h,酶活仍可保持在90%以上。以上结果表明,该酶不仅具有高活性溶栓能力,较强的抗氧化能力,同时对温度、p H、金属离子和模拟胃肠液具有良好的耐受性,其品质远高于国产纳豆冻干粉。同时将超滤分离的产物进行降尿酸肽及其抗氧化功能评价,结果表明:<3 k Da的超滤分子组分对XO抑制活性最高,其IC50值为9.68 mg/m L,并具有较强的抗氧化活性,20 mg/m L时,总抗氧化能力和羟自由基清除率分别为60%和81.1%;80 mg/m L时对超氧离子自由基清除率为89.9%。这表明通过固态发酵获得的发酵产物具有巨大的应用开发潜力。（3）采用Sephadex G-25凝胶层析、LC-MS/MS和分子对接技术对<3 k Da组分中的降尿酸肽进行分离纯化、结构鉴定以及活性预测。从Sephadex G-25 3个分离组分中确定2个具有XO抑制活性组分;LC-MS/MS结合分子对接鉴定出30条具有降尿酸功能的活性肽。利用分子对接技术研究降尿酸肽与XO的相互作用机制。从筛选出的降尿酸肽中选取活性最高的四条小肽:YGFYW、FPGGWPG、WFAFPY、YVYFPY,进行作用模式分析。结果表明,四条活性小肽均能与XO的活性疏水腔结合,且可与XO的关键活性氨基酸残基:THR 1010、VAL 1011、SER 876、ALA 1079和GLU 802形成氢键、π-π作用和π-H相互作用,从而发挥对XO的活性抑制作用。此外,四个小肽对XO的活性抑制倾向于非竞争抑制。以上研究结果表明,螺旋藻发酵液具有潜在的溶栓活性和降尿酸活性的分子,具有进一步研究和开发的价值。