近年来，四环素抗生素（TC）及其抗性基因（TC-ARGs）的污染与散播已引起广泛关注。TC作为一种广谱抗生素被广泛用于促进动植物的生长和疾病治疗。由于大规模使用甚至是滥用，造成一定数量的TC被排入生态环境，从而诱导四环素抗性细菌（TRB）的演变和产生，环境中TC选择性压力是促使TC-ARGs稳定存在和散播的重要原因。已有较多研究报道在不同环境介质中检出较高丰度的TC-ARGs，并发现不同环境因子会对TC-ARGs的水平转移产生影响。尽管如此，现有的大部分研究主要集中于对TC-ARGs丰度水平及其分布归趋方面的研究，而针对TC-ARGs表达水平及其相关影响因子方面的研究还很少。
　　基于此，本课题以从活性污泥中筛选获得的TRB混合菌和单一菌弗氏志贺氏菌（Shigella flexneri）作为研究对象，考察不同浓度TC胁迫对TC-ARGs丰度及其抗性表达水平的作用影响，探讨TC浓度与TC-ARGs丰度及其表达水平之间的相关关系，同时探究三氯生（TCS）杀菌剂暴露对Shigella flexneri中tetC、tetO和tetX基因丰度及其表达水平的变化影响，以期为环境中TC-ARGs的实际生态风险评价提供数据支撑。
　　主要研究结论如下：
　　（1）在不同浓度TC胁迫条件下，污泥混合菌体系中TC-ARGs丰度变化差异较大，其中tetA、tetG和tetW基因丰度随着TC浓度的升高呈现上升趋势。短期（1d）TC胁迫对TC-ARGs转录表达具有促进作用，但长期（7d）TC胁迫对TC-ARGs表达水平的作用影响差别较大，其中，tetA基因表达水平相对稳定，当TC浓度为100mg·L?1时，tetA基因表达水平显著上调，上调倍数最高达5.3倍。相比之下，tetX基因转录表达水平呈现逐渐下调趋势，其他TC-ARGs表达水平在培养周期内变化波动较大。
　　（2）由相关性分析结果可知，TC与TC-ARGs（除tetO和tetX基因外）之间存在显著相关性，且与tetA、tetW和tetX基因表达水平之间显著正相关，表明TC胁迫对TC-ARGs的丰度变化及表达水平具有重要影响。此外，tetA和tetW基因丰度与其表达水平之间具有显著线性相关性，表明一定程度上可采用其基因丰度变化反映其表达水平的变化。
　　（3）在亚致死浓度TC胁迫下（20mg·L?1），Shigella flexneri生长受到抑制，TC-ARGs启动子被激活，导致其基因表达上调。Shigella flexneri中tetC和tetO基因丰度与其表达水平之间具有显著线性相关性。当TC浓度为10μg·L?1~20mg·L?1时，Shigella flexneri中tetC、tetO和tetX基因丰度及其表达水平变化显著，这可能与基因表达相关的供能系统有关，导致出现差异性表达现象。
　　（4）TCS暴露能够增强Shigella flexneri的TC抗药性，升高幅度为5.7%。TCS对不同抗性机制的TC-ARGs作用影响具有差异性，TCS暴露能够削弱tetC和tetX基因丰度及其表达水平，但tetO基因丰度及其表达水平则相应上调，这可能是因为TCS可以改变细菌细胞膜的通透性，而tetC所调控的外排泵通道蛋白位于细胞膜上，因此所受作用影响较为显著。此外，TC分子能够通过通透性强的细菌细胞膜区域扩散进入细胞内，导致tetO基因丰度及其表达水平上调，以阻碍细胞核糖体与TC分子结合。