目的 病毒感染严重威胁着人类的健康,干扰素(IFN)作为抗病毒先天免疫最关键的成分在体内发挥强大的抗病毒作用。MID1是一种重要的E3泛素连接酶,影响多种疾病的发生和发展,然而其对抗病毒先天免疫是否存在影响尚无报道。本文主要探讨MID1对IFN-I的产生及其自身信号的精细调控,旨在为临床抗病毒治疗提供潜在的分子靶标。方法(1)利用MID1过表达质粒或MID1敲低质粒转染细胞,然后感染VSV,SeV或H1N1病毒,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)或免疫印迹法(Western Blot)分析过表达和敲低MID1对病毒复制的影响。(2)利用RT-qPCR检测MID1对IFNβ mRNA的影响,并用双荧光素酶报告基因技术检测MID1对IFNβ转录活性影响,筛选出MID1在IFN-I产生信号中的作用节点;探究MID1对节点蛋白泛素水平和蛋白水平的调控。(3)构建IRF3缺失突变体,利用这些突变体转染细胞,采用免疫共沉淀(Immunoprecipitation)和Western Blot研究MID1与IRF3的结合区域,进一步分析MID1调控IRF3泛素化的具体位点。(4)采用RT-qPCR或Western Blot研究MID1对IFN-I抗病毒效率影响,以及MID1与IFN-I信号中关键蛋白STAT1水平的相关性。(5)利用RT-qPCR、Western Blot或免疫共沉淀的方法明确MID1在IFN-I信号中相互作用的蛋白,并研究MID1对其蛋白水平和泛素化水平影响。结果(1)过表达MID1可以促进VSV、SeV和H1N1病毒的复制,而敲低MID1则显著抑制上述病毒的复制。(2)MID1抑制IFNβ启动子活性,显著下调IFNβmRNA水平,且MID1与IRF3相互作用,通过上调IRF3泛素化水平促进IRF3通过蛋白酶体降解。(3)MID1作用于IRF3的IAD结构域,促进IRF3第313位赖氨酸的泛素化修饰。(4)MID1抑制关键信号蛋白STAT1的磷酸化和活化,抑制干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)的表达,进而抑制 IFN-Ⅰ 信号通路,降低了 IFN-Ⅰ抗病毒效率。(5)MID1通过泛素化降解IFN-I的受体IFNAR2发挥负调控作用,MID1能增加IFNAR2泛素化修饰,并促进IFNAR2通过溶酶体(lysosome)进行降解。结论MID1明显减少机体IFN-I产生并显著抑制IFN-I的抗病毒效率。本研究首次揭示MID1在抗病毒免疫中的重要角色,并可能为临床抗病毒治疗提供新的靶点及策略。