甘蓝型油菜（Brassica napus L.）是我国重要的油料作物,而逆境胁迫严重影响甘蓝型油菜的生长发育。前人研究报道MYB46参与植物次生壁的生物合成,并在植物抗逆性中起作用。本课题组克隆了甘蓝型油菜BnMYB46基因,并通过油菜转基因超表达与抑制表达对其功能进行了分析。本研究在此基础上,完成了BnMYB46的亚细胞定位与转录激活活性分析,并利用启动子表达与酵母单杂交技术鉴定其启动子顺式作用元件,寻找其上游调控因子,为进一步认识BnMYB46转录因子的功能、完善BnMYB46调控网络奠定了基础。主要研究结果如下:1.亚细胞定位与转录激活活性分析将BnMYB46基因融合GFP信号转入洋葱表皮细胞进行亚细胞定位,结果表明BnMYB46定位在细胞核中;利用酵母单杂交系统对BnMYB46蛋白的转录激活活性进行分析,结果显示BnMYB46具有转录激活功能。因此,BnMYB46具有转录因子的一般特性。2.BnMYB46启动子活性分析扩增甘蓝型油菜BnMYB46起始密码子上游1108 bp序列为启动子区段。生物信息学分析显示该区段包含了许多植物顺式调控元件。在此基础上,构建了11个启动子5’和3’侧翼序列不同程度缺失的GUS融合载体,分别瞬时转化烟草和拟南芥原生质体。GUS染色与定量结果表明,BnMYB46启动子在缺失起始密码子上游-615bp至-789bp区间时,启动子活性显著下降。序列分析显示此区间内存在ARE、circadian等顺式作用元件,表明BnMYB46的表达可能受多种因子的调控。3.BnMYB46上游调控因子筛选用上述起始密码子上游-615bp至-789bp（M67）序列以及ARE、circadian顺式作用元件分别构建酵母单杂交诱饵载体p Ab Ai-M67bait、p Ab Ai-ARE与p Ab Ai-Circadian,通过诱饵自激活浓度测定,确定了这3个诱饵载体的Ab A筛选浓度均为650 ng·m L-1。将甘蓝型油菜叶表皮c DNA文库质粒分别转化这3个诱饵菌株进行文库筛选,初步获得6个上游调控因子,分别为Bna A02g01000D、Bna A03g23700D、Bna A05g33620D、Bna A07g18880D、Bna A10g01790D、Bna C08g06800D。根据拟南芥中的同源基因功能注释,这些基因参与了细胞壁特性调控、花粉萌发、次生壁生物合成、脂类转运、表皮发育等生物过程。