【摘 要】
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黄瓜（Cucumis sativus L.）是全球范围内广泛被食用的蔬菜,在众多蔬菜作物中,其首个完成基因组测序,推动了分子育种、功能基因组学及比较基因组学研究的进程。Tnt1为一类来自烟草（Nicotiana tabacum）的反转录转座子,在组织培养过程中能被再诱导转座,在植物有性繁殖时能稳定遗传和分离,因此在很多植物构建突变体库的工作中都发挥了重要的作用,但是利用Tnt1构建黄瓜突变体库的研
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31471156）； 上海交通大学Agri-X基金项目（Agri-X2015002）； 上海市研究生教育创新计划项目(园艺学)；
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黄瓜（Cucumis sativus L.）是全球范围内广泛被食用的蔬菜,在众多蔬菜作物中,其首个完成基因组测序,推动了分子育种、功能基因组学及比较基因组学研究的进程。Tnt1为一类来自烟草（Nicotiana tabacum）的反转录转座子,在组织培养过程中能被再诱导转座,在植物有性繁殖时能稳定遗传和分离,因此在很多植物构建突变体库的工作中都发挥了重要的作用,但是利用Tnt1构建黄瓜突变体库的研究还未见报道。为了探索Tnt1在构建黄瓜突变体库上的应用价值,本研究将成功插入Tnt1的转基因黄瓜后代（T2代）进行自交获得T3代,并对T3代的子叶节进行离体培养获得再生植株,随后通过PCR检测鉴定再生植株及其后代是否含有Tnt1插入,通过Southern blot鉴定Tnt1在组织后代中拷贝数的变化,然后采用染色体步移技术分析后代植株中Tnt1的插入位点,初步证明了Tnt1在黄瓜中具有“复制”和再转座的特性,也获得部分突变材料。主要结果如下:1.将含有Tnt1的转基因黄瓜NCT10植株（T2）与黄瓜自交系’SA0422’进行杂交,再将F1与’SA0422’回交,获得97株BC1F1代植株,经特异性引物PCR鉴定,其中87株含有Tnt1插入,根据后代分离比推算NCT10至少含有3个Tnt1拷贝。2.将含有Tnt1的黄瓜NCT10、NCT05家系（T3）种子的子叶节进行组织培养,共获得145株再生植株。其中23粒NCT10-2种子最终获得再生植株为56株,每片子叶获得的再生芽平均为1～2个。3.采用Southern blot检测T2代NCT10和NCT05以及再生植株T10-1～10-x所包含的Tnt1拷贝数,再次确认了Tnt1插入原始黄瓜材料的基因组中,并可随着组织培养激活其转座活性,在黄瓜基因组中实现转座。4.采用染色体步移技术对NCT10、NCT05株系及其再生苗T10-1～10-x随机抽取10株进行Tnt1插入位点的侧翼序列分离,最终获得部分材料的Tnt1插入位置。结果显示,Tnt1具有位点插入随机性,可插入基因外显子区,也可插入基因间隔区。
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