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水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性消耗性疾病。该病主要引起水貂免疫系统紊乱,进而产生浆细胞增多症和病毒血症。水貂阿留申病在许多国家均有发生,养殖业成熟的国家防控措施比较完善,该病得到了很好的控制,我国由于检测手段不成熟,无法对该病进行有效防控。为了提高水貂阿留申病的诊断效率和防控水平,必须对该病进行全面的普查和监控。对流免疫电泳技术(CIEP)是目前公认的应用最广泛的AMDV检测方法,但是该技术过程繁琐,结果判读不精确,在临床应用上有很大的限制。因此,目前急需建立一种简捷精确的诊断方法对该病进行有效的诊断。首先,本实验室于2013年自中国东北地区分离到5株AMDV(AMDV-L、AMDV-S、AMDV-Z、AMDV-H2-10、AMDV-H3-4),对该毒株的基因序列进行相似性和遗传进化分析,结果显示,5个毒株与中国AMDV毒株的核苷酸、氨基酸相似度均达到94%以上。通过AMDV VP2氨基酸序列比对,发现中国地区毒株与纽芬兰地区毒株VP2氨基酸的突变最为相近,均在25~37 aa位置存在大量甘氨酸缺失,232~242 aa位置存在氨基酸集中突变。VP2332-452氨基酸序列高度保守,选取该段蛋白进行表达。扩增AMDV-L VP2基因片段VP2994-1356,将扩增的目的基因VP2994-1356插入原核表达载体pMAL-c2x中,构建重组质粒,通过IPTG诱导,使融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,Western blotting对融合蛋白进行鉴定,结果表明融合蛋白与AMDV阳性血清具有很好的反应原性且反应条带单一,以his-bind钴树脂纯化融合蛋白,得到条带单一的融合蛋白。以纯化后的融合蛋白作为诊断抗原,建立AMDV抗体的ELISA检测方法,并对反应条件进行优化,利用本研究建立的ELISA对67份阴性血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.372,随后对本方法进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验以及比对试验,结果均良好。本实验室于2014年到2015年间自黑龙江省和吉林省AMDV感染的貂场收集到596份貂血清样品,利用本研究建立的ELISA方法对样品进行检测,检测结果显示,样品血清AMDV阳性率为65.9%,说明在中国东北地区貂场内,阿留申病毒阳性率比较高。本研究建立的AMDV抗体ELISA检测方法为水貂阿留申病毒抗体检测试剂盒的开发奠定了基础,为该病的快速诊断和流行病学调查提供了技术支持。