基于rDNA-ITS序列对盅口属线虫的系统发育分析

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圆线虫主要寄生在马属动物大肠内,以宿主肠组织、体液、消化液为食,往往消弱宿主免疫力,造成营养不良,贫血等症状。因此,为了控制圆线虫病的发生、蔓延、减少损失,圆线虫种类及系统发育分析的调查研究就显得尤为重要。到目前为止,国外众多学者对圆线虫的形态学、生活史、致病机理、疾病控制、流行病学、分子生物学及系统发育学方面的研究较多,而在国内,常见的仅有圆线虫形态学方面的报道,其他方面较少,甚至有些方面的研究还是空白。本论文首次对河南省驴体内寄生的3种盅口属线虫的形态和分子系统发育进行详细地研究。本实验以我国河南省驴体内寄生的3种盅口属线虫(四刺盅口线虫、蝶状盅口线虫、碗形盅口线虫)为研究对象,在光学显微镜下对这三种线虫进行仔细的观察和测量,同时运用扫描电镜技术观察和描述每一种线虫的形态和结构,以期为盅口属线虫的分类鉴定提供新的依据,本实验所采的线虫与已有的文献记载相比,形态、结构基本一致。盅口属3种线虫rDNA-ITS序列比对和系统发育分析结果显示:ITS(包括5.8S)序列总长度为838-842bp,变异位点61个,简约信息位点18个;其中ITS1长度范围为369-370bp,变异位点21个,简约信息位点8个;ITS2长度范围为316-319bp,变异位点40个,简约信息位点10个;5.8S长度均为153bp,且序列完全一致。同时,ITS1区和ITS2区的G+C含量分别为47.2%-48.3%和39.9%-40.7%,ITS1区和ITS2区的种间差异性分别为3.51%-4.05%和7.21%-9.40%。将本实验测得的序列(蝶状盅口属线虫)与Genbank中相对应的比对分析,结果显示,差异性仅为0.43%,种内差异性远远低于种间差异性。最后,以微小杯冠线虫为外群,结合本实验室已测得的3种冠环属线虫序列,构建NJ和MP系统发育树。结果显示:在存在多个单倍体型和样品来自不同地理区域的情况下,碗形盅口线虫、大唇片冠环线虫、小唇片冠环线虫、四刺盅口线虫和冠状冠环线虫聚为一支,蝶状盅口线虫单独聚为一支。表明蝶状盅口线虫与其他种类亲缘关系较远。而在分支中,碗形盅口线虫总与大唇片冠环线虫聚在一起,说明两者亲缘关系较近。
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