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本研究以金花茶成年茎段诱导的胚性培养物为材料,进行体胚发生同步化调控和花状多子叶形胚增殖系统的优化;克隆金花茶体胚SERK基因,并采用实时荧光定量PCR技术进行金花茶体胚发生过程中SERK基因转录水平表达变化研究。主要研究结果如下:1金花茶体胚发生同步化调控与花药胚性愈伤组织的诱导以金花茶成年茎段诱导的胚性培养物为材料,进行体胚发生同步化调控,结果表明:在C1:MS+4%蔗糖+2%山露醇+6%琼脂和C2:MS+4%蔗糖+2%甘露醇+6%琼脂培养基上获得球形胚和心形胚同步化材料,在人为挑选和培养基调控相结合的基础上,获得子叶胚和成熟胚材料。同时,进行了金花茶花药愈伤组织诱导。结果表明:金花茶花蕾低温4℃预处理24h,接种于MS+2.0 mg·L-12,4-D+0.5mg·L-1KT能诱导出愈伤组织,之后挑选愈伤组织接种到分化培养基MS+1.5 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1IAA可观察到白色愈伤组织分化为绿色的生长点,经过筛选和形态学观察初步判断为胚性愈伤组织。2金花茶花状多子叶形胚增殖系统的优化本试验研究了不同浓度甜菜碱、PEG6000、激素组合对花状多子叶形胚的诱导影响。结果表明:在0.8 g·L-1甜菜碱+20 g·L-1甘露醇的MS培养基上,心形胚诱导花状多子叶形胚的效果最好,达到了86.6%。同时还促进次生胚的增殖;在PEG60007.5%+20 g·L-1甘露醇培养基上,花状子叶胚的诱导率最高,达到76.9%。从以上调控培养基上诱导的花状多子叶形胚中挑选较成熟的体胚转移至Y0培养基(1/2MS+NAA 0.2mg/L+BA 2mg/L),体胚由黄色转变为红色,最后在变红的胚体表面又生长出较同步的次生胚。将其重新接种到原来培养基上,培养40 d后就可以获得花状多子叶胚,可重复这一发育途径。3金花茶体胚SERK基因克隆以金花茶球形胚为材料,进行SERK基因克隆。根据其他植物已知SERK基因序列设计引物,应用同源克隆结合RACE技术,获得了金花茶体胚SERK基因cDNA的保守区和3’序列。该目的片段经测序得到的长为1219bp,该序列与登录GenBank其他植物SERK基因序列进行核苷酸比对发现,同源性85%-73%左右;经分析后发现金花茶体胚SERK基因编码277个氨基酸,与GenBank其他植物SERK基因序列进行氨基酸序列比对,同源性较高。这也证明了金花茶体胚SERK基因存在保守性。4金花茶体胚发生过程中SERK基因表达的实时荧光定量PCR分析本研究以18S rRNA作为内参基因,利用实时荧光定量PCR技术,分析了金花茶体胚发生过程中SERK基因转录水平表达变化。结果表明:金花茶体胚发生过程中SERK基因都有不同程度的表达,其中子叶胚SERK基因表达量最大;成熟胚和花状多子叶形胚次之,球形胚和心形胚最小。这表明SERK基因的表达与金花茶子叶胚形成密切相关。