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禽类IFIT(Interferon-induced Proteins with Tetratricopeptide Repeats)家族只有IFIT5一个成员。本实验室前期蛋白质组学研究表明,在传染性法氏囊病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)感染的DF-1细胞内IFIT5上调明显。实验室前期成功从DF-1细胞中克隆出鸡IFIT5基因,并利用原核表达的鸡IFIT5蛋白制备出单克隆抗体,但该抗体只能识别鸡IFIT5蛋白的线性表位,不能识别其构象性表位。因此,为了获得IFA可以反应的chIFIT5抗体,本研究以鸡IFIT5质粒为模板,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将目的基因插入pFastBac-HTA转移载体的多克隆位点ph处,成功构建重组转移载体pFastBac-HTA-chIFIT5;将重组转移载体转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得rBacmid-chIFIT5重组穿梭载体;将rBacmid-chIFIT5重组质粒转染Sf9细胞,Western Blot检测到chIFIT5蛋白在Sf9细胞内成功表达。 为初步分析chIFIT5与IBDV复制之间的关系,根据鸡IFIT5基因序列的特点,分别设计敲低和稳定表达鸡IFIT5的引物。将构建好的敲低载体和稳定表达载体分别在293T细胞进行慢病毒包装,48h后收获包装好的细胞上清感染DF-1细胞,通过药物嘌呤霉素筛选出chIFIT5敲低和稳定表达细胞系。慢病毒介导的chIFIT5稳定表达细胞系感染IBDV后发现对病毒蛋白水平和细胞上清中病毒滴度均未有明显影响。但慢病毒介导的chIFIT5敲低细胞系在感染IBDV后抑制IBDV病毒蛋白的表达,并降低细胞上清中的病毒滴度。该结果提示IFIT5是IBDV复制所必须的重要因子,为后续chIFIT5抗病毒功能研究奠定基础。