论文部分内容阅读
目的:本研究旨在找出在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)中差异表达且具有临床意义的目标lncRNA;并通过进一步的体外细胞实验明确长链非编码RNA GAS6-AS1对结直肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:1.收集并使用从TCGA数据库检索并下载的结直肠癌样本(包含了 647例结直肠癌组织和51例癌旁组织)的RNA-seq数据和相对应的随访信息作为研究对象。然后利用R语言的edgeR包分析差异表达的lncRNA,并找出差异表达显著的lncRNAs,然后通过查找与这些差异表达显著lncRNAs相关的文献,选出目标lncRNAGAS6-AS1后,利用R语言对lncRNAGAS6-AS1进行与结直肠癌预后相关性的分析。2.收集30例结直肠癌患者术后病理标本,利用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测lncRNA GAS6-AS1在肿瘤组织及癌旁对照组织中的差异表达。同样地,实时定量PCR检测lncRNA GAS6-AS1在正常结直肠粘膜细胞株(FHC)和结直肠癌细胞株(HCT116、SW480、SW620、HT29)中的表达情况;将合成的siRNA转染至相对高表达的结直肠癌细胞(HCT116),细胞转染株分为阴性对照组(si-NC)和lncRNA GAS6-AS1抑制组(GAS6-ASlsiRNA1、GAS6-AS1siRNA2、GAS6-AS1siRNA3),采用 RT-PCR验证转染效果。细胞转染成功后,运用克隆平板实验检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检和transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;结果:(1)TCGA数据库下载的结直肠癌组织样本中筛选出差异表达的lncRNAs共1229个,其中上调278个,下调951个;且lncRNA GAS6-AS1在结直肠组织中表达显著高于正常肠上皮组织(P<0.001);(2)lncRNA GAS6-AS1高表达患者的总体生存期(overall survival,OS)和无疾病生存时间(disease-free survival,DFS)明显短于低表达量患者;(3)LncRNA GAS6-AS1作为结直肠癌的诊断指标具有较高的特异性和敏感性,具有潜在的诊断价值。(4)通过对收集的30例结直肠癌患者组织标本进行RT-PCR检测,发现lncRNA GAS6-AS1在癌组织中的表达较癌旁组织高;(5)lncRNA GAS6-AS1在四种结直肠癌细胞株的表达明显高于正常结肠上皮细胞,差异均有统计学意义;(6)克隆平板实验结果表明,下调lncRNA GAS6-AS1的表达后,肿瘤细胞的增殖能力明显减弱;划痕实验和Transwell实验结果表明,下调lncRNA GAS6-AS1的表达后,肿瘤细胞的侵袭及迁移能力明显减弱;结论:相比于正常肠上皮组织及细胞,lncRNA GAS6-AS1在结直肠癌组织和细胞中高表达;LncRNA GAS6-AS1的高表达与患者预后不良相关;lncRNA GAS6-AS1具有促进细胞迁移、侵袭的能力,发挥着促癌基因的作用;