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目的 联合化疗是目前治疗淋巴造血系统肿瘤的常用手段，但迄今用于临床的化疗药物不良反应较大，尤其是对骨髓造血功能的抑制作用会被迫中断化疗；原发或继发耐药往往导致化疗失败。因此，寻求高效低毒的抗肿瘤药物是目前肿瘤治疗的主要课题之一。中药治疗肿瘤在我国已有悠久历史，近年来，世界各国对中草药抗肿瘤的机制进行了广泛研究，从中草药及植物中提取并用于肿瘤治疗的单体越来越多。中药不仅具有化疗药物杀伤淋巴造血系统肿瘤细胞的细胞毒作用，还可以提高机体免疫功能，减轻化疗对机体的损害，并且有逆转耐药的作用。中药还具有无明显毒副作用、药源广泛、价格低廉、宜长期应用的优点，也是一般化疗药物所不能比拟的，利用中药、天然药物及从中提取的有效成分制剂单用或配合化疗治疗淋巴造血系统肿瘤已经日益受到广泛重视，但目前用于临床的中药有效成分制剂较少，仅砷剂、榄香烯等。因此，仍需开发研究效果好，不良反应小的中药制剂应用于临床治疗淋巴造血系统肿瘤。夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L的干燥成熟果穗，具有清火明目，散结消肿之功效，现代药理学研究证明夏枯草具有广泛的药理活性，用于治疗恶性肿瘤已有很长的历史，在体外癌细胞凋亡实验中提示该药能引导SCC-7910癌细胞的凋亡，其作用点可能在G1和G2细胞生长间隙之间，在体内抑瘤实验报告中，还提示了夏枯草中所含的熊果酸及衍生物对P388、L，2:，和人体肺肿瘤细胞A一549均具有显著细胞毒作用。本实验对夏枯草抗淋巴造血系统肿瘤细胞的作用进行了研究。 本研究以人红白血病细胞系K562、人B淋巴瘤白血病细胞系Raji、人T淋巴瘤白血病细胞系Jurkat为靶细胞，研究了夏枯草经水煎醇沉法制成的夏枯草注射液对三种细胞增殖的影响，并运用细胞生物学的方法对夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的特点及可能机制进行了初步探讨，为临床应用夏枯草治疗淋巴造血系统肿瘤提供实验依据。方法1.用MTT法测定夏枯草注射液对K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞的生长抑制率。实验分三组:①实验组:加入不同浓度的夏枯草注射液;②阳性对照组:加入不同浓度的阿霉素;③空白对照组:加入等体积的生理盐水。每个浓度设四个平行孔，分别作用于K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞48小时后，测定细胞生长抑制率，计算出IC，值。同时，用MTT法绘制两种浓度夏枯草注射液（SOmg/m1，100mg/m1）作用于K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞的生长曲线，设空白对照组（加入同体积的生理盐水）。以上实验各重复3次，求平均值。2.用倒置显微镜、姬姆萨染色法、MTT染色法光镜下观察细胞形态，台盼蓝拒染法、流式细胞仪肛染色观察夏枯草注射液对K562细胞的促凋亡活性，用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关蛋白bcl一2、bax蛋白表达的影响，·并用图文分析系统进行定量分析。结果1.夏枯草注射液对3种肿瘤细胞的抑制作用1.1夏枯草注射液对K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞生长均有明显的抑制作用，工C二（实际夏枯草浓度）分别为0.1 1 3Ing/mL、0.1 18mg/毗、0.143mg加l，符合南美抗肿瘤药物研发办公室制定的1C印延SOmg/ml认为有效的标准。三种细胞各实验组与空白对照组0D的差异均有统计学意义，P均<0.001。1.2 26.3mg/ml、39.smg/ml、59.Zmg/ml、88.gmg/ml、133mg/ml的夏枯草注射液分别处理K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞48小时，细胞生长抑制率分别为:K562细胞25.59士1.13%、33.42士0.90%、52.32士1.09%、74.35士0.55%、91.22士1.42%:Raji细胞21.85士1.71%、·28.63士1.50%、55.31士0.88%、76.28士0.60%、 郑州大学（2003届）研究生毕业论文夏枯草抗淋巴造血系统肿瘤作用的实验研究91.93士0.45%;Jurkat细胞15.74士0.57%、36.95士0.88%、48.35士2.09%、64.76 士1.19%、74.55士0.80%。三种细胞抑制率均具有明显的剂量依赖性，相关系数r分别为0.99、O，97、0.94，P分别(0.01、0.01、0.02。1.3’从三种细胞生长曲线看，夏枯草注射液50mg/ml、10Omg/m1及生理盐水分别处理K562细胞、尺aji细胞、Jurkat细胞7天，每天三种肿瘤细胞各自的三个处理浓度的OD值两两相比均具有统计学意义，P<0 .05，较低浓度夏枯草（50mg/m1）作用于K562细胞、Raji细胞、Jurkat细胞后，细胞存活率均于第3天降至最低，随后能部分恢复生长，较高浓度夏枯草（100mg/ml）作用于K562细胞后，从第3天起细胞生长呈明显抑制状态，持续至第7天:而Raji细胞、Jurkat细胞则于第4天起细胞生长呈明显抑制状态，持续至第7天。2.夏枯草注射液（50Ing/m1）作用于K562细胞后，倒置显微镜，姬姆萨染色，MTT染色光镜下观察，均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。台盼蓝染色拒染表明其细胞膜完好，为非坏死细胞。流式细胞仪检测结果显示，处理组细胞凋亡率为（37.15士l，46）%，明显高于对照组细胞凋亡率（5.56士0.68）%（P<0 .001）。免疫细胞化学结果显示，50mg/m1夏枯草注射液作用于K562细胞48小时，bcl一2蛋白表达增强，而bax表达减弱，与对照组相比有显著性差异(P<0.0