论文部分内容阅读
目的:本研究旨在了解2型糖尿病(T2DM)患者外周血中白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-22结合蛋白(IL-22BP)水平的变化及其临床意义,寻找改善糖尿病潜在的治疗靶点。了解IL-22对糖尿病条件下MIN6细胞增殖与凋亡的影响,探讨其在胰岛细胞增殖与凋亡的影响。方法:选取2017年09月～2018年09月在华中科技大学同济医学院附属荆州医院内分泌科住院部收治的T2DM患者90例作为T2DM组研究对象。另选取来医院体检中心体检者40例作为对照(NC)组。收集患者一般人口学资料,如性别、年龄、身高、体重、腰围、臀围、病程,计算体重指数(BMI)、腰臀比(WHR),酶联免疫吸附法检测各组IL-22、IL-22BP含量,测定一般生化指标,如空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1C)、空腹血胰岛素(FINS),测定尿白蛋白及肌酐,计算尿白蛋白肌酐比(UACR),用稳态模型计算HOMA-IR评估胰岛素敏感性。T2DM组患者完成糖尿病肾脏病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病周围神经病变及糖尿病周围血管病变筛查。将对数生长期小鼠胰岛β细胞MIN6分为对照组、糖尿病条件+IL-22组及糖尿病条件+对照组,其中IL-22使用浓度为50ng/ml。利用CCK-8法检测细胞增殖活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Egr-1、PCNA、FasL、Bcl-2、Bax等蛋白表达水平。结果:1.一般人口学资料与实验室结果之间的比较(1)IL-22、IL-22BP的比较:与正常对照组相比,T2DM组IL-22表达水平降低[12.39(7.7,18.49)vs19.55(15.89,28.65)](P<0.001),而 IL-22BP 水平升高[3.65(2.81,5.66)vs3.04(2.63,3.39)](P<0.01)。(2)其他临床特征比较:与对照组相比,T2DM组BMI、WHR升高[24.27±3.08vs22.42±2.54;0.91(0.88,0.96)vs0.86(0.83,0.89)],(P<.01),T2DM 组LDL-C、FPG、HbA1C 均高于对照组[2.28(1.87,2.89)vs2.07(1.8,2.3);10.0±3.26vs5.05±0.62;8.8(7.08,11.13)vs5.15(4.7,5.48)](P<0.001)。T2DM组年龄、性别、TC、TG与对照组相比差异无统计学意义。2.相关性分析(1)IL-22与一般指标相关性分析:Spearman相关分析显示,T2DM组患者外周血清中IL-22表达水平与ABI、IL-22BP呈负相关(p=-0.312,-0.273,P<0.01),与 WHR、FPG、HbA1C、HOMA-IR 呈正相关(p=0.209,0.282,0.243,0.241,P<0.05)。(2)IL-22BP与一般指标相关性分析:Spearman相关分析显示,T2DM组患者外周血清中 IL-22BP 与 HbA1C、LDL-C 呈负相关(p=-0.290,-0.208,P<0.05)。3.血浆IL-22、IL-22BP水平与2型糖尿病发病的Logistic回归分析:以是否患有糖尿病作为因变量,以IL-22、IL-22BP、FPG、WHR、BMI、LDL-C、性别等指标作为自变量,行Logistic回归分析,结果显示,IL-22(OR=0.891,95%CI:0.812-0.978,P<0.05)、IL-22BP(OR=1.930,95%CI:1.028-3.626,P<0.05)、FPG(OR=3.966,95%CI:2.060-7.633,P<0.001)是 T2DM 患者的危险因素。4.2型糖尿病患者血浆IL-22、IL-22BP水平与慢性并发症的关系:在合并糖尿病肾脏病变较无糖尿病肾脏病变患者血清IL-22表达水平降低而IL-22BP表达水平升高[10.09(5.50,16.32)vs13.54(9.46,20.97);4.84(3.07,10.0)vs3.22(2.76,5.01)](P<0.05),IL-22及IL-22BP表达水平在是否合并糖尿病视网膜病变、糖尿病周围神经病变及糖尿病大血管病变的患者中表达差异无统计学意义(P>0.05)。5.CCK-8实验结果显示对照组、糖尿病条件对照组及IL-22组胰岛β细胞MIN6的A450吸光值分别为0.86±0.02、0.44±0.03及0.68±0.01。糖尿病条件对照组与对照组比较,β细胞的增殖率明显下降,当给予IL-22处理后,糖尿病条件下β细胞增殖率明显改善。Western-blot分析显示,在对照组、糖尿病条件对照组及IL-22组中,β细胞增殖活力抑制蛋白Egr-1的表达情况分别是0.10±0.02、0.72±0.07及0.35±0.09,β细胞增殖活力促进蛋白PCNA的表达情况分别是0.59±0.09、0.08±0.01及0.26±0.01。两两比较显示,糖尿病条件对照组与对照组比较,β细胞增殖活力抑制蛋白Egr-1表达上升而促进蛋白PCNA表达下降,当给予IL-22处理后,Egr-1的表达明显下降而PCNA的表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.01)。6.对照组、糖尿病条件对照组及IL-22组三组胰岛β细胞MIN6的凋亡率分别为3.76%±0.11%、28.00%±1.55%及9.94%±1.01%。糖尿病条件对照组与对照组比较,β细胞凋亡率明显上升,当给予IL-22处理后,糖尿病条件下β细胞凋亡率明显下降。当给予IL-22处理后,胰岛β细胞凋亡能够得到一定程度恢复,差异有统计学差异(P<0.01)。Western-blot分析显示,在对照组、糖尿病条件对照组及IL-22组中,促凋亡蛋白Fas-L蛋白的表达分别为0.06±0.01、0.43±0.04、0.21 ±0.04,Bax 蛋白的表达分别为 0.06±0.01、0.49±0.02、0.22±0.02,抑制凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达分别为0.72±0.10、0.10±0.03、0.30±0.06。两两比较显示,糖尿病条件对照组与对照组比较,β细胞促凋亡蛋白FasL及Bax表达明显增加,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下降。当给予IL-22处理后,β细胞凋亡相关蛋白FasL及Bax表达被抑制,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显增加,差异均具有统计学差异(P<0.01)。结论:1.2型糖尿病人群IL-22表达降低而IL-22BP表达水平升高,IL-22表达与 ABI、WHR、HOMA-IR 相关,IL-22BP 表达水平与 HbA1C、LDL-C 相关,可能参与2型糖尿病发生发展。2.合并糖尿病肾脏病变患者血清IL-22表达水平降低而IL-22BP表达水平升高,其可能与糖尿病肾脏病变的发生相关。3.糖尿病条件促进胰岛β细胞凋亡并抑制其增殖,IL-22减少糖尿病条件下胰岛β细胞凋亡,改善增殖。